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水通道蛋白4 抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）標準操作流程
閱讀：2102 發布時間：2018-8-30RSR AQP4Ab 抗體檢測試劑盒是世界上在該項目上同時獲得CE和美國FDA認證的產品，FDA 510(K）注冊編號：K161951； 中國CFDA注冊受理號：JSZ1800016
1.檢測前準備工作：
(1)請確保試劑盒在使用前已在室溫環境下(20-25℃)回溫。
(2)核準本次檢測涉及樣品數，規劃好板面布局。
(3)使用剪刀或其他物品打開試劑盒內微孔板的鋁箔包裝，取出微孔板，將本次檢測不涉
及的多余板條卸除，妥善放回鋁箔包中。鋁箔包內應放置隨裝的干燥劑并以膠帶封好開口，裝回自封袋中隨試劑盒冷藏保存。
(4)對空白孔做好標記。
(5)取出試劑盒內的濃縮洗液(concentrated wash solution)，以純水十倍稀釋濃縮液。總量根
據樣品數決定，手工洗板一般用量為500mL/半板。
(6)準備一塊ELISA 微孔板蓋或若干ELISA 板封口膜。
(7)觀察樣品性狀。新鮮血清或凍存血清應在室溫下保持澄清，如發現渾濁或溶血請在
13000RPM 下離心5 分鐘，并在接下來的檢測中只使用澄清部分。
2.檢測流程
(1)取出試劑盒內的AQP4-生物素(AQP4-biotin)和復溶緩沖液(reconstitution buffer)，每瓶凍
干粉使用移液器加入1.5ml 復溶緩沖液復溶。復溶瓶數根據本次檢測樣品量決定，每瓶生
物素可供50-55 孔使用，單次未使用完的已溶解生物素可在2-8℃中存放3 天。
(2)使用移液器向每孔中分別加入標準品(Calibrator)，對照品(Negative control&Positive
control)以及患者血清50uL。加樣順序中建議標準品按照先陰性質控品、后標準品由低到
高順序加樣。
(3)除空白孔外使用移液器向每孔中加入25ul 復溶的AQP4-生物素
(4)完成加樣后蓋好微孔板蓋，將微孔板放置于酶標板水平搖床上，按500 次/分鐘頻率振
蕩總計兩小時。
(5)取出試劑盒內的鏈霉親和素過氧化物酶(SA-POD)和稀釋液(diluent for SA-POD)，按
照每0.1mlSA-POD 需加1.9ml 稀釋液進行二十倍稀釋。一般情況下完成整板檢測需用
0.6mlSA-POD 與11.4ml 稀釋液。推薦使用單獨容器盛放稀釋后的SA-POD，非特殊情況不
推薦在SA-POD 瓶內直接稀釋。
(6)完成孵育后將微孔板取下，打開板蓋，采取快速翻轉的方式將孔內液體拍凈。使用洗
瓶/多道移液器/洗板機抽取稀釋完成的洗液進行洗板，每孔洗滌三次。完成后將微孔板倒
扣在吸水紙上拍打以除去多余洗液。若采用自動洗板機則可設定抽取量1mL，加液量
300uL，振蕩3-5 秒，洗滌次數為3.
(7)除空白孔外每孔中加入稀釋好的SA-POD 100ul。蓋好板蓋室溫使用水平搖床500 次/分
振蕩20 分鐘。
(8)重復步驟6.如采用手工洗板，完成三次洗液洗板后追加一次純水洗板，用以除去泡沫。
(9)請注意:此步驟中包含空白孔。
使用移液器向每孔中加入100ul 顯色底物(TMB，棕色瓶)，在避光處放置20 分鐘，請勿
振蕩。
(10)此步驟中包含空白孔。使用移液器向每孔中加入100ul 終止液(stop solution)，可觀察
到顯藍色的微孔變為亮黃。
(11)蓋好板蓋，使用水平搖床或手工振蕩微孔5 秒，保證微孔內顯色過程充分停止。
3.讀數及數據處理
(1)讀數儀器的調整
檢測讀數需使用具有讀取特定波長的吸光度功能的儀器。推薦使用全波長酶標儀或具備
450nm 及405nm 濾光片的酶標儀；本實驗推薦在檢測步驟9 時打開儀器預熱，以取得穩
定的波長利于讀數。
(2)讀取吸光度
打開計算機，在控制軟件中打開已準備好的讀板方案，在板面布局中按照本次檢測樣品數
目更改樣品布局。完成設定后點擊”Read”開始讀板。
(3)完成讀數后將結果按讀板方案中的報告單模板輸出至LIS 系統，打印報告單。
4.檢測后工作
(1)讀數完畢的微孔板應小心拆下已使用的板條，請勿將孔內液體濺出。將已使用的板條
按醫療廢物處理。
(2)空板架使用*或其他方式妥善清潔后保存，推薦放回試劑盒微孔板的自封袋內。
(3)本次檢測未使用干凈的復溶生物素及稀釋的SA-POD 可留作下次檢測使用，隨試劑盒其
他成分一并冷藏(2-8℃)貯存。
(4)洗液及濃縮洗液推薦冷藏貯存。