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一、ATCC菌種基本原理

ATCC菌種是一種重要的食源性病原菌。ATCC菌種包括6個(gè)種及若干亞種。其中空腸彎曲桿菌(C. jejuni)、結(jié)腸彎曲桿菌(C. coli)和胎兒彎曲桿菌(C. fetus)占所有從人體分離的99%（空腸彎曲桿菌占90%）。空腸彎曲桿菌為革蘭氏陰性微需氧細(xì)菌。其培養(yǎng)條件苛刻，在空氣中不能生長(zhǎng)，在普通培養(yǎng)基上也難以培養(yǎng)。在微需氧條件下（85 % N2, 5% O2 和10% CO2）在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)48小時(shí)可見(jiàn)無(wú)色半透明的小菌落，zui適生長(zhǎng)溫度為42°C，在37°C下也能培養(yǎng)，但生長(zhǎng)速度較慢。彎曲桿菌增菌用布氏肉湯液體培養(yǎng)基。常用的生長(zhǎng)培養(yǎng)基為Skirrow固體培養(yǎng)基和Camp-BAP固體培養(yǎng)基。彎曲桿菌耐藥實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基為MH固體培養(yǎng)基。為了保證彎曲桿菌的生長(zhǎng)，通常需要在固體培養(yǎng)基中加入5%（v/v）的脫纖維裂解羊血。本實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)述彎曲桿菌所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、菌株分離注意事項(xiàng)和菌株保存方法。

二、彎曲桿菌的培養(yǎng)

1、培養(yǎng)基的配制

1）、Camp-BAP固體培養(yǎng)基的配制：
稱(chēng)取8.92g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購(gòu)買(mǎi)附帶)。

2）、Skirrow固體培養(yǎng)基的配制：稱(chēng)取8.5g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。

FBP原液配置：分別稱(chēng)取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵，溶于20ml蒸餾水中，濾膜過(guò)濾除菌，放置4°C冰箱可保存一周。

2、增菌培養(yǎng)

將新鮮食品，如雞肉，減碎，取5g置于50ml離心管中，加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品，擰緊離心管，先在37°C下預(yù)增菌4小時(shí)，在加入100 ul頭孢哌酮（30mg/ml），并顛倒混勻，放置在微需氧培養(yǎng)箱中42°C培養(yǎng)48小時(shí)。

3、菌株培養(yǎng)

將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)狀態(tài)。微需氧條件的創(chuàng)造可用微需氧產(chǎn)氣袋和密閉培養(yǎng)罐，也可以用微需氧培養(yǎng)箱（三氣培養(yǎng)箱）培養(yǎng)。

4、菌株保存方法

挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養(yǎng)基上平板劃線，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時(shí)，用滅菌棉簽從平板上刮下長(zhǎng)出的菌落，懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中，置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差，存放一周后細(xì)菌復(fù)蘇率即顯著下降。此外，保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。

三、ATCC菌種注意事項(xiàng)

（1）、由于彎曲桿菌是微需氧的細(xì)菌，生長(zhǎng)條件苛刻，存在分離率低、培養(yǎng)復(fù)雜且難以保存的問(wèn)題。從食品中分離彎曲桿菌首先要保證食品的新鮮度，此外還可通過(guò)布氏肉湯增菌步驟來(lái)提高分離率。

（2）、彎曲桿菌的生長(zhǎng)力較弱，容易受到大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等雜菌的污染，因此微生物實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)保持無(wú)菌，為降低雜菌污染，也可在培養(yǎng)基中加入萬(wàn)古霉素和多粘菌素B。

（3）、彎曲桿菌培養(yǎng)用的血平板應(yīng)保持新鮮。脫纖維裂解羊血在4°C條件下可保存兩周，制備好的血平板在4°C條件下zui多保存一周。
Anti-TFF3  三葉肽因子3抗體    規(guī)格：     0.1ml
Anti-TIF1 Alpha/TRIM24  轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體    規(guī)格：     0.2ml
Anti-TIF1 beta/KAP1  轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Phospho-TIF1beta (Ser824)  磷酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體    規(guī)格：     0.1ml
Anti-TIF1 gamma/Trim33  轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1γ抗體    規(guī)格：     0.2ml
Anti-Tissue factor  組織因子抗體    規(guī)格：     0.1ml
Anti-TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑抗體    規(guī)格：     0.1ml
Anti-TFPI-2  組織因子途徑抑制劑-2抗體    規(guī)格：     0.2ml
ATCC菌種