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1）微生物菌種 不同種類的微生物對熱的敏感程度不同，如對熱zui敏感的梅毒螺旋體，在43℃10min就可殺死。同種微生物在不同生長階段，對熱的抵抗力也有很大差異。一般來說，老齡菌比幼齡菌的抗熱性強，孢子比營養細胞抗高溫，抗熱性zui強的是細菌的芽胞。此外，滅菌物品的含菌量越高，在同一溫度下滅菌所需的時間就越長。如用麩皮、玉米粒等天然原料配制的培養基，因其含菌量比化學藥品高，滅菌時應適當加大壓力或延長滅菌時間。

 
2）溫度與作用時間 滅菌時間隨滅菌溫度的升高而縮短，兩者呈反比關系。微生物菌種測定高溫滅菌的效果常以致死溫度和致死時間為標準。致死溫度是指在一定時間內，殺死一定數量的某種微生物所需的zui低溫度。在一定溫度下，殺死一定數量的某種微生物所需的zui短時間為致死時間。
 
3)介質的性質 介質的性質對高溫滅菌也有顯著影響。在一定范圍內，培養基的水分越多，滅菌所需的溫度就越低。培養基中的糖類、蛋白質、脂肪等介質對微生物有保護作用，對其滅菌時必須提高溫度或延長滅菌時間才可獲得可靠的滅菌效果。此外，培養基的pH對微生物的抗熱性也有較大影響。一般在pH7.0時，微生物菌種的抗熱性zui強，尤其在酸性條件下，會明顯減弱其抗熱性。