背景資料:組蛋白翻譯后修飾(PTMs)是表觀遺傳學調控染色質結構的關鍵機制,被稱為“組蛋白密碼"。組蛋白上的PTMs包括乙酰化、甲基化、磷酸化和新的酰化直接影響染色質對轉錄因子的可及性和其他表觀遺傳調控,改變基因組的穩定性,基因轉錄等。組蛋白乙酰化主要發生在核心組蛋白氨基末端的多個賴氨酸殘基上,以響應各種刺激,在基因表達調控、DNA損傷修復、染色質動力學等方面發揮重要作用。大多數情況下,組蛋白H2A主要在Lys5、9、15和36位處發生乙酰化修飾。 H2B主要在Lys5、12、15、16和20位處發生乙酰化修飾。組蛋白H3主要在Lys4、9、14、18、23、27、56和79位處發生乙酰化修飾。組蛋白H4主要在Lys5、8、12、16和20位處發生乙酰化修飾。組蛋白乙酰轉移酶(HATs)和組蛋白去乙酰化酶(HDACs)是主要的調節因子。
產品名稱 | 規格 | 保存條件 |
Acetyl-Histone H4 (Lys77)抗體 | 50ul 100ul 200ul | Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. |
產品分類:抗體 / 一抗
英文名稱:Acetyl-Histone H4 (Lys77)
交叉反應:Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian
標記: Unconjugated
抗體來源: Rabbit
抗體類型: Polyclonal
蛋白細胞定位: 細胞核
純化方法: Anti affinity purification
亞型 IgG
性狀: Liquid
濃度: 1mg/ml
儲存液: 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件: Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏佐劑和弗氏不佐劑
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。
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抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經除菌并添加防腐劑。
標記法:
直接標記法 | 間接標記法 |
抗體的準備:取提純的Ig溶液測定蛋白質含量,置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液,冰槽中攪拌5~10min; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質加0.01~0.02mg的FITC計算,準確稱取后加入抗體溶液中; 標記:邊攪拌邊加入熒光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰庫繼續攪拌12~18h; 透析:結合完畢后,先將結合物以3000r/min離心20min,除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩沖鹽的燒杯中透析過夜; 過柱:取透析過夜的標記物,過葡聚糖凝膠G-25或G-50柱,分離游 | 抗體的準備:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS將待標記的抗體蛋白溶液稀釋到濃度為30~40mg/ml,置于三角燒瓶內放入冰槽中; 熒光素的準備:按每毫克蛋白質加入0.01mg的熒光素稱取,溶解于等量的3%重碳酸鈉水溶液中;將抗體蛋白溶液與FITC溶液等量混合,在0~4℃中攪拌18~24h,充分攪勻; 透析或過柱層析。 |
實驗步驟:
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。
④ 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+"表示:
(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。
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