商品介紹:
本試劑盒是一種常用的比色法檢測細(xì)胞增殖和毒性的試劑盒,其檢測原理:磺酰羅丹明(Sulforhodamine B,SRB)是一種水溶性蛋白染料,能與細(xì)胞內(nèi)蛋白堿性氨基酸結(jié)合形成復(fù)合物,其結(jié)合于細(xì)胞中總蛋白量的多少可以反映細(xì)胞數(shù)的多少。在515nm波長處測得的吸光值與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。 本試劑盒檢測速度快、線性好、操作簡單方便,以96孔板為例,可檢測500次。 使用方法(以96孔板為例) 1)取出細(xì)胞,棄去培養(yǎng)液; 2)小心加入固定液,每孔100μl,4℃孵育1h,棄去固定液; 3)加入清洗液1,每孔100μl,室溫下靜置30s,棄去清洗液1,重復(fù)該步驟; 4)加入染色液,每孔50μl,室溫下避光孵育15min,棄去染色液; 5)加入清洗液2,每孔100μl,棄去清洗液2(該步驟需快速完成,以免染色漏出胞外),重復(fù)該步驟5-10次,直至把多染料洗盡為止; 6)加入溶解液,每孔100μl,室溫下避光孵育5min; 7)于515nm波長檢測其吸光值。 儲存條件:4℃,有效期1年 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞增殖和毒性檢測試劑盒
英文名稱:SRB Cell Proliferation and cytotoxicity assay kit
產(chǎn)品規(guī)格:500T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
蛋白激活受體3(PAR3)英文名稱:PAR3 ELISA Kitα1-chimaerin蛋白抗體包裝25g
蛋白激活受體2(PAR2)英文名稱:PAR2 ELISA Kit信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白9復(fù)合體7b抗體包裝5g
蛋白3(PR3)英文名稱:PR3 ELISA Kit鈣調(diào)神經(jīng)磷調(diào)節(jié)蛋白1抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白1)包裝1g
蛋白磷3調(diào)節(jié)因子亞基1(PPP3R1)英文名稱:PPP3R1 ELISA Kit鈣調(diào)神經(jīng)磷調(diào)節(jié)蛋白3抗體(唐氏綜合征候選區(qū)域蛋白1樣蛋白3)包裝5g
蛋白酪磷受體O(PTPRO)英文名稱:PTPRO ELISA KitCentaurin α1抗體包裝1g
蛋白酪磷受體H(PTPRH)英文名稱:PTPRH ELISA KitB淋巴白血病/淋巴瘤11/鋅指蛋白856抗體包裝5g
蛋白激抑制因子γ(PKIγ)英文名稱:PKIγ ELISA KitB淋巴白血病/淋巴瘤11B抗體包裝25g
蛋白激抑制因子β(PKIβ)英文名稱:PKIβ ELISA Kit鈣平衡調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝5g
蛋白激N2(PKN2)英文名稱:PKN2 ELISA Kit阿爾茨海默病淀粉樣蛋白相關(guān)膠原蛋白抗體包裝100mg
蛋白激D1(PRKD1)英文名稱:PRKD1 ELISA Kit老年癡呆相關(guān)類鈣粘蛋白CS1抗體包裝1g
蛋白激Cη(PKCη)英文名稱:PKCη ELISA Kit凋亡誘導(dǎo)蛋白NALP3抗體包裝25g
蛋白激Cζ(PKCζ)英文名稱:PKCζ ELISA Kit豬圓環(huán)病Ⅱ型衣殼蛋白抗體包裝5g
蛋白激Cε(PKCε)英文名稱:PKCε ELISA Kit血管加壓激活鈣啟動受體蛋白1抗體包裝25g
蛋白激Cδ(PKCδ)英文名稱:PKCδ ELISA Kit干生長因子受體/表面分化抗原抗體包裝5g
蛋白激Cα相互作用蛋白1(PICK1)英文名稱:PICK1 ELISA Kit離子通道蛋白6抗體包裝1g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:purity>99.0%,BR魚精蛋白1試劑盒葉黃;Xanthophyll
粗壯假絲酵母Candida│valida 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品誘導(dǎo)型一氧化氮合成試劑盒愈創(chuàng)木酚;Guaiacol
: Charwoman資源名稱: 鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格:含量>99.0%有絲分裂原活化蛋白激14試劑盒異丁香酚;Isoeugenol
磺酰羅丹明B(SRB)細(xì)胞增殖和毒性檢測試劑盒東方異擔(dān)子 2-氯-5-甲氧基吡啶恙蟲病IgM抗體Elisa
交鏈孢霉 四氨合氯化鉑溶液衣原體IgA抗體Elisa
黃青霉 乙二四乙酸二鈉難辨梭狀芽孢桿BElisa
阿孫鏈霉 3-芐基類缺陷病1Elisa
米根霉 2',3',4'-氧基苯乙酮鄰苯二甲酸酯Elisa
斜蓋傘 咪唑[1,2-A]吡啶-6-甲酸鄰苯二甲酸單乙基己基酯Elisa
球孢白僵 反式-2-己烯酸甲酯巨病Elisa
灰銹赤鏈霉 2-氨基-2,3-二甲基丁風(fēng)疹病Elisa
蘇云金芽孢桿 泮托拉唑鈉單純皰疹病抗原1Elisa
海膽橙色小單孢 右癌易感蛋白1Elisa
平菇 4-氧丁酸甲基酯巨病IgM抗體Elisa
糞生糞殼 鄰氯肉桂腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子Elisa
蠟狀芽孢桿 4-氟-2-酮粉塵螨特異性IgE4抗體Elisa
Pseudomonas 2-氯-5-(苯甲氧基)嘧啶多聚組氨酸標(biāo)簽Elisa
同合小克銀漢霉 4-甲酰基-1-甲酸芐酯狼瘡抗凝物Elisa