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詳細介紹
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Cell proliferation tracer fluorescence probe | 5mg | 1～3天 |
商品介紹：
本品是一種近年來被廣泛應用的細胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細胞的熒光示蹤。基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結果*一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數，同時如果和其它熒光探針聯用，可以獲取不同分裂次數細胞的其它相關信息。 CAS：150347-59-4 分子式：C29H19NO11 分子量：557.47 CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內蛋白的Lysine殘基或其它氨基發生結合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數個月。CFDA SE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且 分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。 由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數的細胞。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結果參考右圖。每一個峰代表一種分裂次數的細胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數的細胞。分裂次數較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。 使用CFDA SE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。目前CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。 CFDA SE標記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發波長可以選擇488nm，此時的發射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。 CFDA SE標記的細胞無論在體外還是體內都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標記后不會從一個細胞轉移到鄰近細胞。CFDA SE標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，佳標記時間需自行摸索。 CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM。配制好的溶液宜當天使用完畢，不宜長時間保存。CFDA SE標記細胞時的終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。在工作濃度為5μM時，一個包裝的本產品共可以標記約1.8升的細胞。 儲存條件：-20℃，有效期6個月。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
蘋果脫氫(MDH)英文名稱：MDH ELISA Kit通道蛋白-2抗體包裝25g
嘌呤核苷磷化(PNP)英文名稱：PNP ELISA Kit血管緊張原抗體包裝10MG
皮質/腎上腺(CORT)英文名稱：CORT ELISA Kit雄激受體抗體包裝10MG
皮質(Cortisol)英文名稱：Cortisol ELISA Kit死亡調節蛋白抗體(凋亡、半胱蛋白激活抑制劑)包裝25g
胚胎干細胞系MESPU30(M30)英文名稱：M30 ELISA Kit軸蛋白1抗體包裝5g
膀胱腫瘤抗原(BTA)英文名稱：BTA ELISA Kit自噬相關蛋白9B抗體包裝25ml
牛小腸堿性磷(CIAP)英文名稱：CIAP ELISA Kit自噬相關蛋白12抗體包裝5ml
凝血因子XIII B(F13B)英文名稱：F13B ELISA Kit自噬相關蛋白13抗體包裝25g
凝血因子XIII A1(F13A1)英文名稱：F13A1 ELISA Kit自噬相關蛋白3抗體包裝5g
凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)英文名稱：F8aLC ELISA Kit整合樣金屬蛋白與凝血4型抗體包裝100mg
凝血因子Ⅻ(FⅫ)英文名稱：FⅫ ELISA Kit磷化活化復制因子2抗體包裝25g
凝血因子Ⅺ(FⅪ)英文名稱：FⅪ ELISA Kit磷化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體包裝5g
凝血因子Ⅹ(FⅩ)英文名稱：FⅩ ELISA Kit絲/蘇蛋白激ATR抗體包裝10g
凝血因子Ⅸ(FⅨ)英文名稱：FⅨ ELISA Kit去整合樣金屬蛋白18抗體包裝250g
凝血因子Ⅷ相關抗原(FⅧ-Ag)英文名稱：FⅧ-Ag ELISA Kit活化轉錄因子6抗體包裝50g
腺苷激抗體免疫球蛋白G(IgG)Nintedanib (BIBF 1120) is a potent triple angiokinase inhibitor for VEGFR1/2/3,
細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)干草鞘氨單胞 津巴布韋凈油白介素7檢測試劑盒
屎腸球 草莓粉白介素8檢測試劑盒
黃孢原毛平革 無花果提取物白介素9檢測試劑盒
耐輻射奇球 葫蘆巴酊白抗原G檢測試劑盒
仁果褐腐串珠霉 葫蘆巴浸膏白衍生趨化因子2檢測試劑盒
多產色鏈霉 棗子酊白血病抑制因子檢測試劑盒
中慢生華癸根瘤 咖啡提取物半胱氨酸蛋白酶1檢測試劑盒
枯草芽孢桿 葡萄粉半胱氨酸蛋白酶3檢測試劑盒
青色鏈霉 梅子汁濃縮物半胱氨酸蛋白酶8檢測試劑盒
黑根霉 李子汁濃縮物半胱氨酸蛋白酶9檢測試劑盒
粘性絲孢酵母 可可殼酊半胱氨酸蛋白酶抑制劑;胱抑素C檢測試劑盒
黑曲霉 丁香花蕾油半乳甘露聚糖檢測試劑盒
冷溫木拉克酵母 菊苣浸膏半乳糖凝集素1檢測試劑盒
長枝木霉 櫻桃粉半乳糖凝集素2檢測試劑盒
雞傷寒沙門氏 羅馬春*提取物半乳糖凝集素3檢測試劑盒
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