詳細(xì)介紹
商品介紹:
英文名稱:alpha-Amanitin 產(chǎn)品規(guī)格:1mg α-Amanitin是一些劇毒蘑菇中的主要毒素,通過(guò)抑制RNA-polymerase II來(lái)發(fā)揮其毒性功能。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):23109-05-9 別名:α-Amanitin;α-Amatoxin 純度:95.14% 分子量:918.97 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
alpha-Amanitin | 1mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大腸埃希氏桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD5抗體Human RELN(Reelin) ELISA Kit人踝蛋白(talin)免疫試劑盒
凝結(jié)芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體Human MRC2(C-type mannose receptor 2) ELISA Kit人花生四烯5脂氧合(ALOX5/LOG5)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體Human NR1H3(Oxysterols receptor LXR-alpha) ELISA Kit人花生四烯15脂加氧(ALOX15/LOG15)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌周期通道和神經(jīng)分化蛋白1抗體Human CCR6(C-C chemokine receptor type 6) ELISA Kit人花生四烯12 - 脂氧合,12S型(ALOX12/LOG12)免疫試劑盒
產(chǎn)棒桿菌凝集蛋白家族10抗體(肝)Human NPEPPS(Puromycin-sensitive aminopeptidase) ELISA Kit人花生四烯(AA)免疫試劑盒
釀酒酵母銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Human NPEPPS(Puromycin-sensitive aminopeptidase) ELISA Kit人琥珀酰合成(SCS)免疫試劑盒
紅球菌COMM結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體Human DEFB127(Beta-defensin 127) ELISA Kit人紅原卟啉(EP)免疫試劑盒
挪威假絲酵母Cordon bleu蛋白樣1抗體Human DEFB129(Beta-defensin 129) ELISA Kit人紅生成受體(EPOR)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌凝集蛋白家族11抗體Human DEFB129(Beta-defensin 129) ELISA Kit人紅生成(EPO)免疫試劑盒
泡盛曲霉銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human PYY3(Putative peptide YY-3) ELISA Kit人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(sm Actinin-α )免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌20號(hào)染色體開放閱讀框96抗體Human PYY3(Putative peptide YY-3) ELISA Kit人亨廷頓相關(guān)蛋白1(HAP1)免疫試劑盒
漢遜德巴利酵母漢遜變種3號(hào)染色體開放閱讀框26抗體Human ZBED3(Zinc finger BED domain-containing protein 3) ELISA Kit人黑色抗體(MC Ab)免疫試劑盒
不解糖鞘單胞菌粘附分子2抗體Human WTIP(Wilms tumor protein 1-interacting protein) ELISA Kit人黑色濃縮激(MCH)免疫試劑盒
棒曲霉耳聾-甲狀腺腫綜合征相關(guān)COBL蛋白抗體Human CCR6(C-C chemokine receptor type 6) ELISA Kit人黑色瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)免疫試劑盒
麻臉蘑菇20號(hào)染色體開放閱讀框195抗體Human UNC13C(Protein unc-13 homolog C) ELISA Kit人黑色瘤活性抑制蛋白(MIA)免疫試劑盒
杏鮑菇7號(hào)染色體開放閱讀框62抗體Human DEFB127(Beta-defensin 127) ELISA Kit人黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:ACS reagent,95 %王不留行黃苷
: IEBCSO5001資源名稱: 球形芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:AR阿多尼弗林堿
巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格:>98%旱蓮苷A
RNA聚合酶II抑制劑食砜節(jié)桿 三氟甲氧基苯基異酸酯糖聚糖Elisa
芭蕉生粘鞭霉 -氟-4-高密度脂蛋白Elisa
多毛棒桿 5--2-磺酰金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白5Elisa
新月彎孢 3,5-二甲氧基芐蛋白多糖Elisa
異常畢赤酵母 D-胱氨酸膽固側(cè)鏈裂解Elisa
天藍(lán)微紅鏈霉 2--4-氟吡啶P450膽固側(cè)鏈裂解Elisa
枯草芽孢桿 2,4-二氟吡啶維生B6Elisa
孢囊放線 4-溴-3-硝基三氟甲苯維生EElisa
西唐氏鏈霉 1,9-壬二硫新蝶呤Elisa
棲熱 4-溴-7-氮雜Ⅲ型前膠原氨基端肽Elisa
大腸桿 子種綠A碳酸酐Elisa
山東戈登氏 4--2-氟強(qiáng)啡肽AElisa
馬爾他布魯氏 4--3-氟酪蛋白Elisa
黎巴嫩鏈霉黎巴嫩亞種 5-氟-2-甲酸乙酯碳酸酐1Elisa
枯草芽孢桿 乙酰乙酸鋰總酯Elisa