商品介紹:
HM30181是一種有效的選擇性的P-glycoprotein抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):849675-66-7 別名:HM30181A 純度:97.03% 分子式:C??H??N?O? 分子量:688.73 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
拜氏梭菌Ras信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體Human PLRG1 ELISA Kit心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)ELISA Kit
雷斯青霉血藍(lán)蛋白抗體Human PLSCR3 ELISA Kit心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA Kit
赤霉菌腦海綿狀血管畸形蛋白1抗體Human PM20D2 ELISA Kit協(xié)同激分子受體(CMR)ELISA Kit
白靈菇KBP蛋白抗體Human PLXNB1 ELISA Kit小表皮粘蛋白(SBEM)ELISA Kit
地霉半乳糖酵母kappa型阿片受體抗體Human PLK2 ELISA Kit小而密低密度脂蛋白(sLDL)ELISA Kit
慢生根瘤菌激肽原1重鏈抗體Human PMEPA1 ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)ELISA Kit
赤曲霉鈣激活通道蛋白β1抗體Human PLK3 ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA Kit
發(fā)酵畢赤酵母電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human LDLR(Low-density lipoprotein receptor) ELISA Kit小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA Kit
白地霉磷化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human PLK4 ELISA Kit相撲結(jié)合UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)ELISA Kit
柱孢犁頭霉磷化電壓門控性通道蛋白Kv4.2抗體Human PLK5 ELISA Kit腺相關(guān)病(AAV)ELISA Kit
土生類諾卡氏菌KT3 tag抗體Human PLOD2 ELISA Kit腺苷脫(ADA)ELISA Kit
香豌豆束莖病菌激肽釋放1抗體Human PLUNC ELISA Kit腺苷環(huán)化1(AC-1)ELISA Kit
綠粘帚霉激肽釋放3/舒血管3抗體Human PLSCR4 ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2(ABCG2)ELISA Kit
枯草芽胞桿菌激肽釋放4抗體Human PLP2(Proteolipid protein 2) ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)ELISA Kit
檸檬色短小桿菌組蛋白H3賴9甲基化1C抗體Human PLXDC2 ELISA Kit腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ABCG2)ELISA Kit
鐮刀菌驅(qū)動(dòng)蛋白家族Member14蛋白抗體Human PLEKHO2 ELISA Kit線粒體肽蛋亞砜還原(MSRA)ELISA Kit
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)類葉升麻苷;麥角甾苷(毛蕊花糖苷)
焦耳Cottricia│pennes 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)升麻
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 %升麻苷
P-glycoprotein抑制劑(HM30181)phospho-c-Jun (Ser63) 化原癌因c-Jun抗體Fmoc-L-脯氨 98%
Jun B 活化蛋白激B抗體Fmoc-L-蘇氨 BR
Jun D 活化蛋白激D抗體Fmoc-L-谷氨酰 BR
CK I alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-谷氨二酯鹽鹽 98%
CK II Alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-苯氨酯鹽鹽 98%
CK II alpha/STK 屬絲/蘇氨蛋白質(zhì)激抗體L-苯氨芐酯鹽鹽 98%
P-CK 廣譜角蛋白PCK抗體L-脯氨芐酯鹽鹽 98%
CK18 角蛋白18抗體L-絲氨酯鹽鹽 99%