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詳細介紹
產品屬性：
中文名稱：支原體檢測試劑盒
英文名稱：Mycoplasma Detection Kit
產品規格：100T-200T
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒是利用熒光染料檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區域，因為支原體的DNA中A-T含量高(55％～80％)，所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點，即為支原體的DNA染色斑，說明有支原體污染。Hoechst 33258的大激發波長為346nm，大發射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，大激發波長為352nm，大發射波長為461nm。 操作步驟： 貼壁細胞： 1.被檢細胞接種于無菌的6孔細胞培養板中，接種密度為1-2×104。同時，接種正常無支原體感染的同種細胞，作為陰性對照。 2.5天后，先吸去培養液，再加入1ml的固定液，靜置20min， 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風干。風干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。 6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。 懸浮細胞： 1.收集需檢測的細胞，1500rpm，5min。 2.將收集的細胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。 3.吸去固定液，晾干。 4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。 5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風干。風干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。 6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發光激發，觀察細胞周圍是否有藍色熒光小點或串珠狀熒光小點。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)英文名稱：8-OHdG ELISA Kit1號染色體開放閱讀框194抗體包裝1g
70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)英文名稱：HSPA8 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框198抗體包裝25g
70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)英文名稱：HSPA5 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框21抗體包裝5g
70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)英文名稱：HSPA1A ELISA Kit1號染色體開放閱讀框216抗體包裝1g
60kD熱休克蛋白(HSPD1)英文名稱：HSPD1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框43抗體包裝25g
5羥色胺轉運蛋白(SERT)英文名稱：SERT ELISA Kit1號染色體開放閱讀框50抗體包裝5g
5-羥色胺(5-HT)英文名稱：5-HT ELISA Kit1號染色體開放閱讀框49抗體包裝1g
5-羥基乙(5-HIAA)英文名稱：5-HIAA ELISA Kit1號染色體開放閱讀框53抗體包裝5g
50kDa核孔蛋白(NUP50)英文名稱：NUP50 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框54抗體包裝1ml
27kDa熱休克蛋白(HSPB1)英文名稱：HSPB1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
25-羥基維生D3(HVD3)英文名稱：HVD3 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框56抗體包裝100g
25kDa突觸關聯蛋白(SNAP25)英文名稱：SNAP25 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框65抗體包裝25g
210kDa核孔蛋白(NUP210)英文名稱：NUP210 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框64抗體包裝100g
20S-蛋白體(20S-PSM)英文名稱：20S-PSM ELISA Kit1號染色體開放閱讀框69抗體包裝25g
2',5'-寡腺苷合成1(OAS1)英文名稱：OAS1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框77抗體包裝500g
馬氏副球菌Paracoccus│marcusii 質量規格：>99%,BR,三合物胰脂肪試劑盒異槲皮苷;Isoquercitrin
海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│marina 質量規格：HPLC>98%,標準品胰抑制試劑盒異鼠李-3-O-新橙皮苷;Isorha
結核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質量規格：>99%,BR胰腺癌標志物CA242 原蘇木B;Protosappanin
支原體檢測試劑盒枯斑擬盤多毛孢 3-氯-4-甲酰苯酸,95%磷酸二酯2Elisa
硬水黃桿 1-氟吡啶四氟酸鹽過氧化物Elisa
熱纖梭* ,4,6-基吡啶三氟磺酸鹽RecQ解旋樣蛋白5Elisa
肺形側耳 (R)-3-氨基四鹽酸鹽載脂蛋白AElisa
纖維鏈霉 乙二二硫代縮氨基脲脂蛋白AElisa
茄鏈格孢 N-Boc-L-環己基甘氨表皮調節Elisa
叢毛單胞 1-甲基吲唑-4-羧酸Derlin1蛋白Elisa
戊糖片球 Boc-1-氨基環烷甲血清運鐵蛋白受體Elisa
布魯氏 生物Ⅵ型 戊酸鈉原鈣黏1Elisa
變紫青霉 2-氯-3-甲基-4-(甲基磺酰)雌酮Elisa
尖孢鐮刀胡麻專化型 5-氨基-2-三氟甲基吡啶顆粒蛋白前體Elisa
梨形毛霉 O,O-二乙基二硫代磷酸銨, 一般為谷氨酸受體2AElisa
屎腸球 庚酸乙酯生長分化因子7Elisa
中慢生華癸根瘤 4,4'-亞甲基-雙(3-氯-2,6-二乙基苯)骨成型蛋白8AElisa
枯草芽孢桿 1-(2-芐氧基-4-氟苯基)乙酮生長分化因子6Elisa
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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