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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit | 50ml*2|250ml*2 | 1～3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
橙能透過胞膜完整的細胞，嵌入細胞核DNA，與雙鏈DNA結合后發出綠色熒光，溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細胞，嵌入核DNA，發橘紅色熒光。凋亡的細胞呈現為染色增強，熒光更為明亮，均勻一致的圓狀或固縮狀、團塊狀結構。非凋亡細胞核呈現熒光深淺不一的結構樣特征。二者很容易判別。在熒光顯微鏡下觀察，可見四種細胞形態：活細胞(VN)，核染色質著綠色并呈正常結構;早期凋亡細胞(VA)，核染色質著綠色呈固縮狀或圓珠狀;晚期凋亡細胞(NVA)，核染色質為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀;非凋亡的死亡細胞(NVN)，核染色質著橘紅色并呈正常結構。本產品AO、EB溶液濃度分別為100ug/ml，所含穩定劑不影響實驗效果。 使用方法：(僅供參考) 使用前先根據用量，將AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，先用現配。 對于貼壁細胞或爬片，去掉培養基，用PBS洗兩遍去除殘余培養基和未貼壁細胞，加入新的PBS;如果需要觀察全部細胞特性，保留未貼壁細胞，可以直接在培養基中加入工作液。按照每毫升培養基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。 對于懸浮細胞，可直接加入工作液或離心收集細胞后在PBS中加入工作液。按照每毫升培養基或PBS中加入20ul工作液即可。室溫放置2-5min后于熒光顯微鏡下觀察。 注意事項： 含酚紅培養基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養基。 染色液工作濃度和染色時間可根據具體實驗情況適當調整，以期達到佳效果。 儲存條件：4℃避光密封保存，有效期一年 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
Ⅱ型前膠原基端原肽(PⅡNT)英文名稱：PⅡNT ELISA Kit磷化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝50mg
Ⅱ型膠原交聯羧基端肽(CTXⅡ)英文名稱：CTXⅡ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框167抗體包裝1g
Ⅱ型膠原(COL2)英文名稱：COL2 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框168抗體包裝250mg
ⅡD組磷脂A2(PLA2G2D)英文名稱：PLA2G2D ELISA Kit1號染色體開放閱讀框170抗體包裝250mg
ⅡA組磷脂A2(PLA2G2A)英文名稱：PLA2G2A ELISA Kit1號染色體開放閱讀框172抗體包裝1g
Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)英文名稱：PⅠCP ELISA Kit1號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g
Ⅰ型前膠原基端原肽(PⅠNP)英文名稱：PⅠNP ELISA Kit1號染色體開放閱讀框174抗體包裝25g
Ⅰ型前膠原(PCⅠ)英文名稱：PCⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框177抗體包裝5g
Ⅰ型膠原交聯羧基端肽(CTXⅠ)英文名稱：CTXⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框180抗體包裝1g
Ⅰ型膠原交聯基端肽(NTXⅠ)英文名稱：NTXⅠ ELISA Kit1號染色體開放閱讀框182抗體包裝1g
Ⅰ型膠原α2(COL1α2)英文名稱：COL1α2 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框183抗體包裝25g
Ⅰ型膠原α1(COL1α1)英文名稱：COL1α1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框187抗體包裝5g
Ⅰ型膠原(COL1)英文名稱：COL1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框189抗體包裝5g
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)英文名稱：HSP90β1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框190抗體包裝100ml
90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)英文名稱：HSP90αA1 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框192抗體包裝25ml
輪枝菌Verticillium│sp. 質量規格：HPLC>98%,標準品乙肝表面抗原大蛋白試劑盒原花青B2;Procyanidin B
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質量規格：>98%,BR乙脫氫試劑盒原花青B1;Procyanidin B
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規格：HPLC>98%,標準品乙呋試劑盒乙酰紫堇靈;Acetylcorynoli
吖啶橙-EB雙染色試劑盒 叔丁基二硫抗mannobioside糖抗體Elisa
亮白曲霉 2,2-二氟-3-羥基戊酸乙酯鋅-α2脂蛋白Elisa
烏克蘭毛霉 2-溴-3,4-二氟苯巖藻糖基化觸珠蛋白Elisa
短柄帚霉 6-甲基-3H-噻吩[2,3-d]嘧啶-4-酮膽固-25-羥化Elisa
鼠李糖乳桿 氯磺酚S受體自身抗體Elisa
產氣腸桿* 3,5-二溴-2-氯吡受體Elisa
新疆鹽單胞 5-溴-4-甲基-1H-吲唑S轉移Mu1Elisa
禾谷鐮孢 2-氯-3-氟-5-硝基吡啶乙酰CoA羧化Elisa
總狀共頭霉 噻吩并[3,2-b]吡啶-7-蛋白激M2Elisa
大孢聯軛霉 5-溴吲唑-3-甲酸系統性紅斑狼瘡IgGElisa
黑曲霉 2-乙硫基-5-硝基吡啶系統性紅斑狼瘡IgAElisa
圍小叢殼 L-肌肽鋅系統性紅斑狼瘡IgMElisa
蠟樣芽胞桿 4-苯氧基芐糖化血紅蛋白Elisa
博斯氏屬 2-叔丁苯纖維蛋白單體Elisa
葉球形微桿 4,6-二氯-2-甲氧基嘧啶酮酸激M2Elisa
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