公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:細胞核提取試劑盒
英文名稱:Nuclear Extraction Kit
產(chǎn)品規(guī)格:50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
細胞核提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細胞的細胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,性能穩(wěn)定。 操作步驟: 1. 樣本處理 a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer,再加入50μL Reagent A,0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織,可用雙層紗布過濾。 b. 培養(yǎng)細胞勻漿:消化細胞,PBS洗滌,800 g 離心5~10 min收集細胞,計數(shù)。每次提取需要5 ×107個細胞,加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞,再加入50μL Reagent A,將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨細胞20~30次。 2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中,4℃,700g 離心5 min。細胞核沉淀在收集管底部,棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉淀。 3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃,700 g 離心5min。細胞核沉淀在管底。 4. 棄上清,在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉淀,1000g 離心10min ,棄上清,得到較純的細胞核沉淀。 5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。 儲存條件:4℃ |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Corin蛋白(CRN)英文名稱:CRN ELISA KitCD80抗體包裝250mg
Cerberus蛋白(CER)英文名稱:CER ELISA KitCD19抗體包裝1g
CD83分子(CD83)英文名稱:CD83 ELISA KitC-C元件趨化因子26抗體包裝250mg
CD5抗原樣蛋白(CD5L)英文名稱:CD5L ELISA Kit5號染色體開放閱讀框22抗體包裝25g
CD40配體(CD40L)英文名稱:CD40L ELISA Kit鈣激活離子通道4蛋白抗體包裝5g
CD3d分子(CD3d)英文名稱:CD3d ELISA Kit嗜粒趨化蛋白3抗體包裝1g
CD320分子(CD320)英文名稱:CD320 ELISA Kit嗜粒趨化蛋白3抗體包裝250mg
CD30配體(CD30L)英文名稱:CD30L ELISA Kit趨化抗體包裝25g
CD163分子(CD163)英文名稱:CD163 ELISA Kit5號染色體開放閱讀框55抗體包裝5g
CD14分子(CD14)英文名稱:CD14 ELISA Kit表面趨化因子受體7抗體包裝1g
CCAAT增強子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)英文名稱:CEBPβ ELISA Kit色c氧化7A2抗體包裝5g
C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)英文名稱:C4BPα ELISA KitCD36抗體包裝100g
B-細胞淋巴瘤因子2(Bcl2)英文名稱:Bcl2 ELISA Kit固合成CYP11B2抗體包裝25g
B-細胞激活因子受體(BAFFR)英文名稱:BAFFR ELISA Kit7號染色體開放閱讀框16抗體包裝5g
B-細胞激活因子(BAFF)英文名稱:BAFF ELISA Kit10號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
: IFFI2377資源名稱: 黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品乙酰肝試劑盒銀鍛苷;Tiliroside
淡紫擬青霉Paecilomyces│lilacinus (Thom) Samson 質(zhì)量規(guī)格:純度>99%,AR乙酰羧化合成試劑盒印;Indaconitone
IMRUR1547資源名稱: 披發(fā)糖多孢菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品乙酰酯試劑盒鹽黃柏堿;Phellodendrine
細胞核提取試劑盒香菇 7-溴-2,4(1H,3H)-喹唑啉二酮并殖吸蟲Elisa
美人魚發(fā)光桿美人魚亞種 (E)-3-(叔丁基二甲基硅氧基)烯-1-基-酸頻哪酯鞭毛蟲Elisa
仁果叢梗孢 N-CBZ-甘氨酸乙酯布魯東氏酪氨酸激Elisa
醋化醋桿 3-Boc-6-氧雜-3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己烷Wnt-3a蛋白Elisa
尖孢 2,3,6-三氟苯基乙酸低氧誘導因子Elisa
格爾木馬賽 伊班磷酸甘肽Elisa
嗜熱鏈球 苯并[b]噻吩并-3-基酸鼠基因相關(guān)蛋白Elisa
假單胞 3,5-二甲基-吡唑-4-羧酸轉(zhuǎn)化蛋白RhoA-GTPElisa
綠粘帚霉 Boc-D-精氨酸鹽酸鹽谷氨酸氧化Elisa
平滑白蛋巢 (1S,4S)-2-Boc-2,5-二氮雙環(huán)[2.2.1]庚烷谷氨酸氧化Elisa
冬菇屬 1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸β位淀粉樣前體蛋白裂解1Elisa
節(jié)桿 2-氨基-4-苯基酮戊二酸Elisa
灰色鏈霉灰色亞種 B-(6,9-二苯基-9H-咔唑-3-基)酸EB病抗體Elisa
洋蔥伯克霍爾德 3-(二甲氨基)-2-異基烯酸甲酯α淀粉Elisa
膠孢 2-(2-氯-5-苯甲基)-5-(6-氟吡啶-3-基)噻吩膽囊收縮;縮膽囊八肽Elisa