詳細介紹
商品介紹:
DAPI 是一種藍色核酸染料,優(yōu)先染dsDNA,DAPI 表現(xiàn)為可集中結合在DNA 雙鏈的AT 小溝,結合后的DAPI 熒光會發(fā)生20 倍增強。同時,DAPI 也可以結合RNA,與DNA 不同,一般認為DAPI 結合于RNA 的AU 區(qū)。DAPI/RNA 的復合體(500nm)有比DAPI/dsDNA復合體(460nm)更長的熒光波長。DAPI 是一種常用的多色熒光技術中的核復染劑。他的藍色熒光可以與綠色、紅色、橙黃色探針形成鮮明對比。 儲存:4℃,避光 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
10mg|1mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
波棱英文名稱: C12E8Fas活化激結構域蛋白2抗體包裝100ml
博落回(標準品)英文名稱: Calcium florideFas活化激結構域蛋白1抗體包裝25ml
薄荷(標準品)英文名稱: Calcium stearateF-box蛋白21抗體包裝100g
補骨脂(標準品)英文名稱: Cedar wood oilGATA結合蛋白1伴侶蛋白抗體包裝25g
補骨脂定(標準品)英文名稱: Cerium(III) sulfate, octahydrate胎球蛋白B/Fetuin β抗體包裝5g
補骨脂二氫黃;補骨脂(標準品)英文名稱: Chromium (III) oxide叉頭蛋白O1抗體包裝25g
補骨脂二氫黃(標準品)英文名稱: Cobalt (II, III ) oxide鐵蛋白重鏈抗體包裝5g
補骨脂酚(標準品)英文名稱: Cobaltous acetate, tetrahydrate類固受體復合物蛋白FKBP5抗體包裝5g
補骨脂寧;補骨脂異黃(標準品)英文名稱: Cobaltous powder纖維性鞘結合蛋白1抗體包裝100g
補骨脂(標準品)英文名稱: Copper powder纖維生長因子結合蛋白2抗體包裝25g
布渣葉(標準品)英文名稱: Copper(II) carbonate basic肌動蛋白結合蛋白Fascin3抗體包裝25mg
菜油甾英文名稱: Copper(II) oxide結構特異性核FEN1抗體包裝100g
參麥提取物(標準品)英文名稱: Copper(II) pyrophosphateFAM61B蛋白抗體包裝500g
蠶沙(標準品)英文名稱: Copper(II) tartrate, trihydrateFAM63A蛋白抗體包裝100mg
蒼耳亭(標準品)英文名稱: dADP上皮分泌型FAM3C蛋白抗體包裝500mg
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質量規(guī)格:>98.5%,USP32,BR,可用于培養(yǎng)嗜肺軍團菌抗原試劑盒去基雛葉龍膽;Tetrahydrox
副溶血弧菌Vibrio│parahaemolyticus 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品視黃羥基異亮;4-Hydroxyisol
0大腸桿菌克菌株Escherichia coli 0 質量規(guī)格:>99%,VEGFR 抑制劑,培養(yǎng)級食欲受體試劑盒去氫松香;Dehydroabietlc
細胞核染料DAPI匍枝根霉(黑根霉) 3-氯-2-氟苯甲包柔氏螺旋體Elisa
柳松菇 5-溴-2,3-二氟苯甲MBD3Elisa
波狀曲霉 2-溴-6-氟苯甲核纖層蛋白B2Elisa
果香地霉 2-氯-5-氟異煙酸發(fā)育調節(jié)GTP結合蛋白2Elisa
表皮葡萄球 托麥汀N-myc下游調節(jié)基因2Elisa
孟氏假單胞 2-溴吡啶-4-甲酸甲酯酮酸脫氫E2Elisa
靈芝 反-1,4-二氨基環(huán)已烷CD209分子Elisa
海南小雙孢 苯二酸胸苷激1Elisa
庫德里阿茲威畢赤酵母 2,3-二溴-6-甲基吡啶丁型肝炎IgM抗體Elisa
尖孢鐮刀胡麻專化型 3-溴噻酚-2-羧酸甲酯白介36αElisa
中慢生華癸根瘤 3-氯-2,4-二氟苯白介36βElisa
Ochrobactrum 2-氟-4-煙酸血管內皮生長因子受體2Elisa
米曲霉 2-正基烷-1,3-二抗肌炎抗體譜3抗體IgGElisa
節(jié)桿屬 1-甲基-4-硝基-1H-吲唑內皮脂肪Elisa
食砜節(jié)桿 5-甲氧基水楊酸酪蛋白激2Elisa