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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 12:26:59瀏覽次數(shù)：253
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 500T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9650 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Calcein-AM/PI Double Stain Kit |
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒
英文名稱：Calcein-AM/PI Double Stain Kit
產(chǎn)品規(guī)格：500T
發(fā)貨周期：1～3天
商品介紹：
Calcein-AM是一種對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，發(fā)綠色熒光（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein-AM（本身不發(fā)熒光）被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)并發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低，是適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針，而且不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。 由于死細(xì)胞缺乏酯酶，Calcein-AM僅用于對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞生存能力測(cè)試和短期標(biāo)記。因此，Calcein-AM常常與死細(xì)胞熒光探針如碘化丙啶（PI）等聯(lián)合使用，同時(shí)進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的熒光雙重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿過(guò)活細(xì)胞的細(xì)胞膜，僅能穿過(guò)死細(xì)胞膜的無(wú)序區(qū)域而到達(dá)細(xì)胞核，并嵌入細(xì)胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI僅對(duì)死細(xì)胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞。而用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細(xì)胞。 本試劑盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的雙重染料，來(lái)進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞的雙重染色標(biāo)記，從而進(jìn)行活細(xì)胞和死細(xì)胞水平的分析。根據(jù)我司優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)體系，單次就200μl細(xì)胞懸液進(jìn)行染色。 注意事項(xiàng) 1）由于Calcein-AM對(duì)濕度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量，分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。 2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作時(shí)一定要注意防護(hù)。若接觸到皮膚，需要立即用自來(lái)水清洗。 3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
谷半胱連接催化亞基(GCLC)英文名稱：GCLC ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝500mg
谷半胱連接(GCLM)英文名稱：GCLM ELISA Kit中心體蛋白55kDa抗體包裝5ml
孤啡肽(OFQ)英文名稱：OFQ ELISA Kit富含半胱與表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白2抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白還原(MHBR)英文名稱：MHBR ELISA Kit骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體包裝5g
高遷移率族蛋白1(HMG1)英文名稱：HMG1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白4B(4C)抗體包裝1g
高密度脂蛋白(HDL)英文名稱：HDL ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝250mg
高分子量激肽原(HMWK)英文名稱：HMWK ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝1g
高爾基蛋白73(GP73)英文名稱：GP73 ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝5g
干細(xì)胞因子受體(SCFR)英文名稱：SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗體包裝10MG
干細(xì)胞因子(SCF)英文名稱：SCF ELISA Kit柯薩奇病蛋白受體B抗體包裝100g
干擾誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)英文名稱：ITαC ELISA Kit腫瘤抑制因子FBW7抗體包裝25g
干擾調(diào)節(jié)因子3(IRF3)英文名稱：IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗體包裝5g
干擾γ誘導(dǎo)單核因子(MIγ)英文名稱：MIγ ELISA Kit鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體包裝10g
干擾γ(IFNγ)英文名稱：IFNγ ELISA Kit周期依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體包裝5g
干擾β(IFNβ)英文名稱：IFNβ ELISA Kit著絲粒蛋白H抗體包裝1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR載脂蛋白C3試劑盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白C2試劑盒異古倫賓;IsocoluMbin
暫未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分,Sigma C1768載脂蛋白C1試劑盒;6-Hydroxyindole
Calcein-AM/PI活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒炭彎曲嗜酸 2-氯-3-氟-4-吡啶叉頭框蛋白O磷酸化Elisa
枯草芽孢桿 3-(4-甲基哌-1-基)苯胰島受體磷酸化Elisa
根瘤 2-溴-5-酚煙堿型乙酰膽堿受體Elisa
副豬嗜血桿 血卟啉單甲艱難梭BElisa
水黏結(jié)桿 多烯紫杉三水合物PAD-3 AbElisa
灰略紅鏈霉 3-甲磺酰氨基苯酸抗氨甲酰化蛋白抗體Elisa
細(xì)鏈格孢 (3R,4R)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯異性腦炎特異性IgM抗體Elisa
大腸埃希氏 二乙基二硫代氨酸鈉高香草酸Elisa
藤倉(cāng)赤霉 4,4,5,5,5-五氟-1-戊帕金森氏病2ParkinElisa
嗜麥芽黃單胞 3-氟-2-甲生長(zhǎng)停滯基因CElisa
羅倫隱球酵母 匹伐他汀鈣CD63分子Elisa
大腸桿 6-溴-3,4-二氫-2H-異喹啉-1-酮白球蛋白樣受體亞家族A成員3Elisa
黑曲霉 2-氨基-6-氯苯鼠疫F1抗體Elisa
無(wú)氧芽孢桿 2-三氟甲基-4-內(nèi)皮轉(zhuǎn)化Elisa
枯草芽孢桿 順-六氫異林金黃色葡萄球Elisa
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