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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 10:48:21瀏覽次數(shù)：296
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50次 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9557 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | Apoptosis?Inducers?Kit |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。 細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對(duì)PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色， 因此通常將Annexin V與PI配合染色， 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。 操作步驟： 1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備： a．對(duì)于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。 b．對(duì)于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。 2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。 3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。 4、取 100μl的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。 5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。 6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。 Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜 Jurkat細(xì)胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜 儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)英文名稱：AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g
抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號(hào)抗體包裝100g
抗酒石性磷5b(TRACP-5b)英文名稱：TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g
抗酒石性磷5b(TRACP5b)英文名稱：TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移α4Gn-T抗體包裝5g
抗酒石性磷(TRACP)英文名稱：TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基抗體包裝10ml
抗抗體(AsAb)英文名稱：AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白4抗體包裝1g
抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)英文名稱：ATGA/TGAB ELISA Kit基乙二半脫氫磷泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移抗體包裝25g
抗?fàn)钕龠^氧化物抗體(TPO-Ab)英文名稱：TPO-Ab ELISA Kit賴戊二還原抗體包裝5g
抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)英文名稱：EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域6抗體包裝25g
抗環(huán)胍肽抗體(Anti-CCP-antibody)英文名稱：Anti-CCP-antibody ELISA Kit精2抗體包裝5g
抗紅細(xì)胞抗體(RBC)英文名稱：RBC ELISA Kit固還原家族1成員C3抗體包裝1g
抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)英文名稱：gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激受體包裝5g
抗核抗體(ANA)英文名稱：ANA ELISA Kit褐黑相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g
抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)英文名稱：ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg
抗單核細(xì)胞抗體(AMA)英文名稱：AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g
磷化粘附相關(guān)激抗體促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激的 IC5
Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒釀酒酵母 N-十八烷基苯甲酰低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6檢測(cè)試劑盒
潮汐紅色桿 (3S,4S)-3-氨基-4-羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯低氧誘導(dǎo)因子-1α檢測(cè)試劑盒
釀酒酵母 3-溴-4-甲氧基苯低氧誘導(dǎo)因子-2α檢測(cè)試劑盒
纖維黃鏈霉 間甲苯磺酰氯抵抗素檢測(cè)試劑盒
米川黃桿 2,7-二甲基咔唑凋亡誘導(dǎo)因子檢測(cè)試劑盒
鏈輪枝屬 苯基基氫氧化銨(的甲溶液)凋亡相關(guān)因子配體檢測(cè)試劑盒
阪崎腸桿 1-叔丁氧羰基-4-氨基鹽酸鹽丁型肝炎IgG抗體檢測(cè)試劑盒
嗜線蟲賽雷氏 六水六氟硅酸鎂蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M2抗體檢測(cè)試劑盒
蠟?zāi)?/span> 5-溴-2-氯苯甲蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M3檢測(cè)試劑盒
小海螺 4,5-二氟鄰苯二甲酸端粒酶檢測(cè)試劑盒
栗疫病 4,5-二氟鄰苯二甲酸酐端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶檢測(cè)試劑盒
肋生鹽弧肋生亞種 1-異基吡唑?qū)ΨQ性二甲基精氨酸檢測(cè)試劑盒
教堂小短桿 4-叔丁氧羰基-2-嗎啉甲酸對(duì)氧磷酶檢測(cè)試劑盒
多產(chǎn)色鏈霉 1-Boc-4-甲基-4-甲酸對(duì)氧磷酶1檢測(cè)試劑盒
大腸埃希 3,4-二氟水楊酸多巴檢測(cè)試劑盒
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