詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
A-443654 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
A-443654是一種有效的Akt serine/threonine kinases三種激酶抑制劑,能夠作用于Akt1,Ki值為160pM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:552325-16-3 純度:99.90% 分子量:397.47 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
三葉草根瘤菌增食欲A/欲激A抗體Human MMP-2(Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit富亮α2糖蛋白1(LRG1)
瓜亡革菌增食欲A/欲激A抗體Human MPO(Myeloperoxidase) ELISA Kit富含半胱蛋白61(Cyr61/CCN1)
果生鏈核盤菌2'-5'-寡腺苷合成3抗體Human P-Cadherin(Cadherin, Placental) ELISA Kit復制蛋白A(RPA-70)
膠凍樣芽胞桿菌牙齒發育相關蛋白Osr2抗體Human CD26(Dipeptidyl peptidase 4) ELISA Kit復合前列腺特異性抗原(CPSA)
*珊瑚菌(不是這個菌)胚胎干關鍵蛋白190抗體(N端)Human CLU(Clusterin) ELISA Kit附睪蛋白4(HE4)
沃氏富鹽菌起始識別復合蛋白亞基1抗體Human CD26(Dipeptidyl peptidase 4) ELISA Kit輔Q10(CoQ10)
鏈霉菌泛特異性蛋白Otubain2抗體Human MPO(Myeloperoxidase) ELISA Kit封閉抗體(BA)
節桿菌屬精神發育遲滯相關蛋白Oligophrenin-1抗體Human CXCL1(Growth Regulated Oncogene Alpha) ELISA Kit封閉蛋白4(CLDN4)
維多利亞維希尼克氏酵母末端多聚腺苷2蛋白抗體Human CLU(Clusterin) ELISA Kit分泌性白蛋白抑制因子(SLPI)
乳乳球菌乳亞種口腔癌高表達的蛋白1抗體Human CXCL7(Plaet basic protein) ELISA Kit分泌型免疫球蛋白A(SIgA)
脫被毛球馬勃氧化固結合蛋白4抗體Human P-Cadherin(Cadherin, Placental) ELISA Kit分泌型磷脂A2(sPLA2)
貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型抗凋亡蛋白OLFM44抗體Human CXCL11(C-X-C motif chemokine 11) ELISA Kit分泌型卷曲相關蛋白5(SFRP5)
釀酒酵母結腸癌過度表達蛋白1抗體Human EGF(Epidermal Growth Factor) ELISA Kit分泌型卷曲相關蛋白4(SFRP4)
谷棒桿菌卵巢癌免疫反應抗原抗體Human EGFR(Epidermal growth factor receptor) ELISA Kit分泌型卷曲相關蛋白2(SFRP2)
科恩根霉卵巢癌相關基因1抗體Human CXCL9(C-X-C motif chemokine 9) ELISA Kit分泌型卷曲相關蛋白1(SFRP1)
枯草芽孢桿菌氧化應激誘導生長抑制因子1抗體Human BMP-4(Bone Morphogenetic Protein 4) ELISA Kit分泌粒蛋白1(嗜鉻粒蛋白B)(CHGB/SCG1)
乳桿菌屬Lactobacillus│sp. 質量規格:>95%,BR
胞內分枝桿菌Mycobacterium│intracellulare 質量規格:>97%
白黃側耳Pleurotus│cornucopiae 質量規格:>85%,美國進口
絲氨酸/蘇氨酸激酶Akt抑制劑錐形赤褶菇2-2 EC肉湯顆粒堿性磷酸Elisa
胡頹子殼囊孢 SS瓊脂顆粒降鈣Elisa
根瘤 堿性蛋白胨水顆粒降鈣原Elisa
黑木耳(黑29) 沙氏葡萄糖瓊脂培養基顆粒膠原IElisa
枯草芽孢桿枯草亞種 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)顆粒角蛋白16Elisa
溶桿 煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB)顆粒結締組織生長因子Elisa
假單胞屬 乳糖膽鹽發酵培養基顆粒結合珠蛋白Elisa
淀粉產色鏈霉 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)顆粒金屬硫蛋白Elisa
枯草芽孢桿枯草亞種 鹽胱氨酸增液(SC)顆粒金屬肽含血小板反應蛋白1Elisa
氈毛青霉 四硫磺酸鹽煌綠增液基礎(TTB)顆粒晶體蛋白αElisa
枯草芽孢桿枯草亞種 Baird-Parker瓊脂基礎顆粒晶體蛋白α抗體Elisa
紅球 7.5%肉湯顆粒精氨酸加壓Elisa
貝葉多孔 孟加拉紅培養基顆粒巨噬炎性蛋白-1αElisa
黑曲霉 胰蛋白胨大豆瓊脂顆粒抗酸性磷酸Elisa
白黃小脆柄菇 腦心浸出液肉湯(BHI)顆粒抗酸性磷酸5bElisa