以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
CDK1抑制劑(Ro-3306) | Ro-3306 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
英文名稱:Ro-3306 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Ro-3306是一種有效的,選擇性的CDK1抑制劑,對(duì)CDK1,CDK1/cyclin B1和CDK2/cyclin E的Ki值為分別為20nM,35nM和340nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):872573-93-8 純度:96.77% 分子量:351.45 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
大腸埃希氏桿菌FAM129B蛋白抗體Human CAMSAP1 (Calmodulin-regulated spectrin-associated protein 1) ELISA KIT牛白介10(IL-10)免疫試劑盒
蟻巢傘屬微管動(dòng)力調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human CAB39 (Calcium-binding protein 39) ELISA KIT牛白介1(IL-1)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌FAM50A蛋白抗體Human BSDC1 (BSD domain-containing protein 1) ELISA KIT牛γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒
紅緣擬層孔菌FAM113A蛋白抗體Human CASQ1 (Calsequestrin-1) ELISA KIT牛γ基丁(GABA)免疫試劑盒
FAM150A蛋白抗體Human C1GALT1C1 (C1GALT1-specific chaperone 1) ELISA KIT牛β-乳球蛋白(β-LG)(過敏原Bosd5)(LGB)免疫試劑盒
聚生殼菌FRMD8蛋白抗體Human NACC2 (Nucleus accumbens-associated protein 2) ELISA KIT牛β羥基丁脫氫(β-HBDH)免疫試劑盒
葡萄座腔菌FGFR1癌基因伴侶蛋白抗體Human P2RY12(P2Y purinoceptor 12) ELISA Kit牛β羥丁(βOHB)免疫試劑盒
多鏈霉菌FAM家族蛋白40A抗體Human CADPS2 (Calcium-dependent secretion activator 2) ELISA KIT牛β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒
黃曲霉FAM55D蛋白抗體Human CPPED1 (Serine/threonine-protein phosphatase CPPED1) ELISA KIT牛β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒
葡萄芽假絲酵母組織激活過氧化活化增生受體γ蛋白抗體Human CADPS (Calcium-dependent secretion activator 1) ELISA KIT牛β-防御(β-Defensins)免疫試劑盒
葡紫紅菇FAM21C蛋白抗體Human BOK (Bcl-2-related ovarian killer protein) ELISA KIT牛α乳清蛋白(α-La)免疫試劑盒
光滑青霉FAM13C1蛋白抗體Human BRAP (BRCA1-associated protein) ELISA KIT牛α晶體B鏈(CRYAB)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌FAM59B蛋白抗體Human BCAR3 (Breast cancer anti-estrogen resistance protein 3) ELISA KIT牛α干擾(IFN-α)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌FAM59A蛋白抗體Human BFSP1 (Filensin) ELISA KIT牛α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒
根癌土壤桿菌FAM160B1蛋白抗體Human BSCL2 (Seipin) ELISA KIT牛P物質(zhì)(SP)免疫試劑盒
擬枝孢鐮孢FAM161B蛋白抗體Human BRI3BP (BRI3-binding protein) ELISA KIT牛N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)免疫試劑盒
立枯絲核菌Rhizoctonia│solani 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)茄尼
Oriloxodonta鏈球菌Streptococcus oriloxodontae Shinozaki-Kuwahara et al. 2014 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥98.5%(GC)千層紙
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.6%10-羥基癸烯
CDK1抑制劑(Ro-3306)蘇云金芽胞桿 2,6-二甲基-3,5-庚二酮肉堿Elisa
海洋交替赤桿 2--6-羥基苯甲狀腺原氨酸Elisa
假單胞 2-氨基-3-(三氟甲基)吡啶神經(jīng)靶標(biāo)酯Elisa
蘋果殼囊孢 2--5-溴嘧啶神經(jīng)絲蛋白Elisa
枯草芽孢桿 N-琥珀酰亞基-N-甲基氨酸酯神經(jīng)元烯化Elisa
釀酒酵母 Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-oc腎上腺Elisa
薛瓦酵母 4,5-二氟-2-甲酸生長(zhǎng)Elisa
釀酒酵母 4-甲基傘形酮油酸酯生長(zhǎng)抑Elisa
大豆慢生根瘤 5-溴-7-氮雜瘦Elisa
尖鐮孢 4-Methylumbelliferyl heptanoate髓過氧化物Elisa
擬青霉 2,3-二酸髓鞘堿性蛋白抗體Elisa
芽孢桿屬 3-溴-2-羥基苯甲髓樣分化因子88Elisa
模擬乳粉蠟樣芽胞桿質(zhì)控樣品(定量) 二氧化錫糖皮質(zhì)Elisa
側(cè)耳 1-硅基-1-戊炔銅藍(lán)蛋白Elisa
黃綠木霉 乙烯基溴化鎂褪黑Elisa