商品介紹:
英文名稱:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C30H44FN4O11 分子量:655.7 純度:≥95% (TLC) 儲(chǔ)存:-20℃,有效期6個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
枯草芽孢桿菌鋅指蛋白851抗體Human FGFBP2 ELISA Kit豚鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒
草分枝桿菌嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體Human FKBP10 ELISA Kit豚鼠脂(CHE)免疫試劑盒
線殼囊孢(座線孢)磷化c-fos抗體Human FKBP1A ELISA Kit豚鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫試劑盒
百脈根中間根瘤菌磷化c-fos抗體Human FKBP14 ELISA Kit豚鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒
煙色齒耳磷化原癌基因c-Jun抗體Human FGFR1OP ELISA Kit豚鼠單氧化(MAO)免疫試劑盒
櫟金錢菌磷化原癌基因c-kit抗體Human FGFBP3 ELISA Kit豚鼠催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
反硝化鹽單胞菌1號(hào)染色體開放閱讀框148抗體Human FNDC3A ELISA Kit豚鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
薄層菌屬性T抗原-4抗體Human FKBP1B ELISA Kit豚鼠促卵泡(FSH)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢鈣調(diào)調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)蛋白抗體Human FN3KRP ELISA Kit豚鼠雌激(estrogen)免疫試劑盒
暗擬莖點(diǎn)霉(可訂購)緊密連接蛋白1抗體Human FNTA ELISA Kit豚鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒
產(chǎn)卟啉桿菌1號(hào)染色體開放閱讀框149抗體Human FNIP1(Folliculin-interacting protein 1) ELISA Kit豚鼠表皮生長因子(EGF)免疫試劑盒
產(chǎn)黑鏈霉菌磷化原癌基因c-kit抗體Human FLCN ELISA Kit豚鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒
針葉樹散斑殼磷化原癌基因c-kit抗體Human FLJ25006 ELISA Kit豚鼠白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒
球孢白僵菌磷化淋巴衍生C-型凝集抗體Human FLJ10357 ELISA Kit豚鼠白介8(IL-8)免疫試劑盒
葡萄座腔菌2號(hào)染色體開放閱讀框39抗體Human FLI1 ELISA Kit豚鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒
稻生黃單胞菌2號(hào)染色體開放閱讀框49抗體Human FMN1 ELISA Kit豚鼠白介5(IL-5)免疫試劑盒
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα1微球蛋白/bikunin前體試劑盒5-羥基馬鞭草苷
沙漠奇異球菌Deinococcus│deserti 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRα1性糖蛋白試劑盒去氧基醉椒
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα1抗胰糜蛋白試劑盒去氫駱駝蓬堿
Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制劑)多主葡萄殼 4-叔丁基苯-1,2-二白介22Elisa
鞘氨單胞 4-(溴甲基)苯酸白介23Elisa
康寧木霉 腐植酸鈉白介27Elisa
構(gòu)巢曲霉 3,5-二茴香硫白介3Elisa
米根霉 (S)-(-)-4-羥基-2-吡咯烷酮白介32Elisa
沉積物鹽坑微 BOC-L-4-苯氨酸白介33Elisa
紫麥角 反-4-[4-(4-n-戊基環(huán)己基)苯基]苯白介35Elisa
大豆慢生根瘤 聚(4-苯乙烯磺酸-共聚-馬來酸)鈉鹽白介38Elisa
食物芽孢桿 六甲磷酰三(HMPA)白介4Elisa
大腸埃希 4-芐氧基溴苯白介5Elisa
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 (R)-(+)-1,1'-(二苯基膦基)烷白介6Elisa
蘇云金芽孢桿 (S)-(+)-環(huán)氧烷白介7Elisa
黑曲霉 1H,1H,2H,2H-全氟-1-癸白介8Elisa
大腸埃希氏 4-溴-2-甲白介9Elisa
產(chǎn)氣莢膜梭 C型 2-間二甲苯白抗原GElisa