詳細(xì)介紹
商品介紹:
用途: 流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等。 注意事項(xiàng): Propidium Iodide簡(jiǎn)稱PI,又稱碘化丙啶,分子量為668.40,對(duì)人體有刺激性,本試劑為儲(chǔ)存液。 儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
1ml|10×1ml | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
前杯莧甾英文名稱: Metalaxyl solutionGATA結(jié)合蛋白5抗體包裝1g
前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fenitrothion生長(zhǎng)分化因子9抗體包裝250mg
芡實(shí)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (2-Chloroethyl)trimethylammonium chloride促代謝型谷受體4抗體包裝5g
茜草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: BrassinolideGST標(biāo)簽蛋白抗體包裝25g
茜雙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Acetamiprid磷脂?;鞍拙厶?4抗體包裝5g
羌活(寬葉羌活)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Carbendazim眼鏡蛇蛇蛋白抗體包裝1g
羌活(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CarbarylGalNAc-T14抗體包裝250mg
羌活(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Stachydrine hydrochloride骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白2抗體包裝500mg
羥基紅花黃色A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Isosilybin甘油?;D(zhuǎn)移4抗體包裝1g
羥基積雪草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Theaflavin 3,3′-digallate葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白12抗體包裝250mg
羥基積雪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Palmatine chloride hydrate顆粒溶抗體包裝1g
羥基酪;3,4-二羥基乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide腦膠質(zhì)瘤相關(guān)蛋白抗體(鋅指蛋白5)包裝5g
羥基茜草/紅紫(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因gamma(GROγ)抗體包裝1g
喬松(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝5g
茄尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamideG蛋白偶聯(lián)受體GPR142蛋白抗體包裝100g
嗜氣單胞菌Aeromonas│hydrophila 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR凝血因子Ⅶ試劑盒馬錢苷;Loganin
炭疽芽孢桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格:>98%凝血因子Ⅴ試劑盒蒙花苷;Linarin
食芽孢桿菌Bacillus benzoevorans Pichinoty et al. 1987 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品凝血因子Ⅱ試劑盒馬錢苷;Loganic acid
碘化丙啶PI染色液(1mg/ml)余氯速測(cè)盒(檢測(cè)范圍0~1mg/L) 3,5-二氯芐25羥基維生D2Elisa
根瘤 乙酰氨基二酸二甲酯分泌型淀粉樣前體蛋白αElisa
大腸埃希 2-氯-N-甲基乙酰酪蛋白磷酸肽Elisa
細(xì)黃鏈霉乳糖變種 3,5-二甲基吡唑2-超氧陰離子自由基Elisa
托姆青霉 [1,2-雙(二環(huán)己基)乙烷鈀(II)氯化物心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白CElisa
克魯斯假絲酵母 環(huán)戊基乙酮無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員2Elisa
鳳尾菇 1-溴-4-苯基萘血小板膜糖蛋白纖維蛋白原受體Elisa
大豆慢生根瘤 冠6烯饑餓-O-乙?;D(zhuǎn)移Elisa
醋酸鈣不動(dòng)桿 2,3-庚二酮2',5'-寡腺苷酸合成1Elisa
雙孢蘑菇 吖脂肪酸結(jié)合蛋白4Elisa
發(fā)酵乳桿 Boc-L-脯氨酸甲酯Sushi重復(fù)含蛋白質(zhì)連鎖2Elisa
柳巴克利酵母 Fmoc-4-氨基-L-苯氨酸性別決定區(qū)Y框蛋白9Elisa
汞對(duì)照液 3-氨基-4--吲唑固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1CElisa
球毛殼 2,3-二氯吡啶-4-酸腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2Elisa
圣堡羅沙門氏 2,3-二甲基-4-氯吡啶-N-氧化物L(fēng)-型電壓依賴鈣離子通道α1F亞基Elisa