以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Caspase-5活性測定試劑盒 | Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
本試劑盒適用于測定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-5活性。試劑盒測定原理基于Caspase-5特異水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見光分光光度比色方法測定,吸光度值對應(yīng)于Caspase-5的水解活性。 細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育、生理、病理過程中對細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個(gè)成員。Caspase-5分子量47.7kD,與ICE有51%的同源性,在過量表達(dá)時(shí)可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。 所需儀器:酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板;或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。 工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內(nèi)測定。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
谷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1H-Benzotriazole因子受體樣因子1抗體包裝500g
谷維(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride半胱亞磺脫羧抗體包裝1g
呱西替柳(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dihydrochloride型肝炎NS2反式調(diào)節(jié)蛋白/衰老相關(guān)的基因10蛋白抗體包裝25g
呱西替柳雜質(zhì)A(楊愈創(chuàng)木酚酯)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betahistine Dimesilate固合成CYP11B2抗體包裝5g
癸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: INSULIN分裂周期蛋白8抗體包裝1g
桂美(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth oxide 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體包裝1g
果糖二磷鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Chloro-1,3-propanediol分裂周期蛋白16抗體包裝5g
哈西奈德(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bisoprolol fumarate有絲分裂著絲粒蛋白F抗體包裝5g
核黃磷鈉混合物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bromhexine HCl9號染色體開放閱讀框115抗體包裝25g
紅霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL蛋白抗體包裝5g
胡椒乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bupivacaine HClCTDSPL2蛋白抗體包裝1g
琥珀;丁二(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Butenafine HCl乙酰酯相關(guān)蛋白抗體包裝1g
琥珀多西拉敏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體包裝250mg
琥珀潑尼龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril二氫嘧啶相關(guān)蛋白5抗體包裝5g
琥珀普卡必利英文名稱: (S)-Carbidopa磷化二氫嘧啶樣2抗體包裝1g
: NRS-1000ATCC43897DSM3037資源名稱: 強(qiáng)壯類芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP2007,EP5.心肌營養(yǎng)1試劑盒維生A;Vitamin A
微小鏈霉菌Streptomyces│parvulus 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%心肌特異性肌鈣蛋白T試劑盒烏頭原堿;Aconine
多頭節(jié)叢孢Arthrobotrys│polycephala 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品心肌錨蛋白重復(fù)域1試劑盒烏美司;Ubenimex
Caspase-5活性測定試劑盒灰樹花 2-氨基-5-氯-3-吡啶,95%腎前體Elisa
根瘤 1-Boc-1-RNA結(jié)合基元蛋白8AElisa
澳大利亞糖絲 2-氟-5-氯苯半胱氨酰白三烯受體Elisa
根瘤 吡啶并[3,4-D]嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮尿皮質(zhì)Elisa
釀酒酵母 2,4,6-三氟類缺陷病抗體1+2Elisa
釀酒酵母 4-氯-2-酸高密度脂蛋白2bElisa
維羅納假單胞 6-氟-2-氯吡啶高密度脂蛋白2Elisa
平臍蠕孢 2-氯鹽酸乙脒鹽酸鹽高密度脂蛋白3Elisa
金黃色葡萄球 N,N-二甲基基硅抗甲流H5(H5N1)血凝蛋白IgG抗體Elisa
玻利維亞鹽單胞 2-氧代環(huán)戊基乙酸乙酯抗甲流H5(H5N1)血凝蛋白IgM抗體Elisa
草生鏈霉 1,4-二氮雜-5-環(huán)庚酮鹽酸鹽Flag標(biāo)簽Elisa
金頂側(cè)耳、榆黃磨、金頂磨 1-芐基-4-酮鹽酸鹽角蛋白19片段Elisa
葡萄座腔 Cbz-O-芐基-L-絲氨酸生長因子Elisa
適宜劍 4-溴-2,5-二氟苯磺酰氯糖原合成激3βElisa
雞樅(雞) 雷瑣太爾促甲狀腺受體Elisa