產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase-6活性測(cè)定試劑盒
英文名稱:Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
本試劑盒測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-6活性。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-6特異水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide),釋放出游離的硝基pNA,后者呈黃色在405nm具有大吸收峰,用可見(jiàn)光分光光度比色方法測(cè)定。其吸光度值對(duì)應(yīng)于Caspase-6的水解活性。 Caspase-6也稱Mch-2,其前體蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚體,可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡,可見(jiàn)于各種器官和細(xì)胞,在正常發(fā)育、生理、病理過(guò)程中對(duì)細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族,包含10多個(gè)成員。Caspase-6也稱Mch-2,其前體蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚體,可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白PARP,剪切核膜上關(guān)鍵蛋白Lamin A,其對(duì)于Lamin A的識(shí)別位點(diǎn)是VEID。 運(yùn)輸及保存:試劑常溫運(yùn)輸。到達(dá)后按要求儲(chǔ)存,1年內(nèi)穩(wěn)定。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
格列美脲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tiotropium bromide hydrate 6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框222抗體包裝1g
格列美脲雜質(zhì)2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amiodarone HCl熱休克蛋白58抗體包裝1g
格列美脲雜質(zhì)Ⅰ/4-[2-(3-乙基-4-基-2-氧...英文名稱: Amiodarone HCl色C P450 17A1抗體包裝100g
格列齊特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amotriptan malate膜蛋白CLDND1抗體包裝25g
格列齊特雜質(zhì)Ⅰ/1-(3-氮雜雙環(huán)[3.3.0]辛基)...英文名稱: Vidarabine/Ara-A二氫嘧啶相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
更昔洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vidarabine/Ara-A霉單克抗體包裝100ml
更昔洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ampicillin TrihydrateCD98重鏈抗原抗體包裝25ml
庚炔諾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ampicillin Trihydrate鈣蛋白抑制蛋白抗體包裝500ml
枸櫞鉍雷尼替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Atipamezole HClcGMP依賴性蛋白激1抗體包裝1g
枸櫞己定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Atipamezole HCl胞漿鈣獨(dú)立磷脂A2抗體包裝100g
枸櫞莫沙比利(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Azatadine Maleate1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框98抗體包裝500g
枸櫞噴妥維林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bambuterol HClCOX4NB蛋白抗體包裝1g
枸櫞他莫昔芬E-異構(gòu)體英文名稱: Bambuterol HCl腫瘤/抗原77抗體包裝5g
枸櫞鋅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Benserazide HClCD81抗體包裝1g
枸櫞奧芬那君;枸芬那君(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Canagliflozin輔Q10B抗體包裝100g
蠕形青霉Penicillium│vermiculatum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品鋅指蛋白644試劑盒維生B2;Vitamin B2
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,富馬鹽,BR鋅α2糖蛋白試劑盒維生E;Vitamin E
#白色短桿菌Curtobacterium│albidum (Komagata and Iizuka) Yamada and Komagata 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品心型脂肪結(jié)合蛋白試劑盒維生C;Vitamin C
Caspase-6活性測(cè)定試劑盒普通變形桿 3-基苯酸頻哪酯盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員1Elisa
橙鱗傘2 正戊基三苯基溴化磷血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1Elisa
北里胞 5-溴-3-甲基吡啶-2-甲酸甲酯血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體4Elisa
羊無(wú)漿體(青海海宴株) (三苯基亞正膦基)乙視黃Elisa
鮑姆針層孔 (S)-(-)-2-羧基環(huán)丁鱗狀癌相關(guān)抗原2Elisa
枯草芽孢桿 2-氯-6-甲酸神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)受體P75Elisa
鼠李糖乳桿 3-溴苯基硫脲低氧誘導(dǎo)因子1Elisa
棘孢曲霉 4,6-二氯-5-氟嘧啶精漿彈性硬蛋白Elisa
釀酒酵母 1-芐基-2-羧酸精漿彈性硬蛋白Elisa
類阿達(dá)青霉 4-氯異硫酸苯酯糖類抗原15-3Elisa
帶小棒鏈霉 2-(3,4-二氯芐基)苯并咪唑半乳糖苷Elisa
都柏林克羅諾桿都柏林亞種 2,3-二溴-1,4-二半胱氨酰白三烯Elisa
球孢白僵 3-溴-5-氟苯乙DDX4Elisa
Sphingomonas abaci 1-萘乙酸乙酯基膜聚糖;內(nèi)腔蛋白Elisa
大腸埃希 3-羥基己酸甲酯前腎Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)