以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
英文名稱:Caspase 6 Inhibitor Z-VE(OMe)ID(OMe)-FMK 產(chǎn)品規(guī)格:20μl 濃度:5mM in DMSO 分子式:C31H45FN4O10 分子量:652.9 純度:≥95% (TLC) 儲存:-20℃,有效期12個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
貝倫格葡萄座腔菌癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體Human FOXJ3 ELISA Kit豚鼠抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌磷化癌易感基因1抗體Human FOXO6 ELISA Kit豚鼠巨噬移動抑制因子(MIF)免疫試劑盒
微黃漢納酵母磷化癌易感基因1抗體Human FOXJ3 ELISA Kit豚鼠巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒
豬丹絲菌磷化上皮鈣粘附分子抗體Human FOXH1 ELISA Kit豚鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌磷化癌易感基因1抗體Human FOXP1 ELISA Kit豚鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒
大腸桿菌屬BRD2蛋白抗體Human FOXO4 ELISA Kit豚鼠基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)免疫試劑盒
pcDNA6/V5-His ABRD3蛋白抗體Human FOXL2 ELISA Kit豚鼠黃體激(LH)免疫試劑盒
叢花青霉磷化酪蛋白激6/腫瘤激抗體Human FOXO6 ELISA Kit豚鼠環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
棉花新鞘菌磷化蛋白酪激ATK抗體Human FOXP1 ELISA Kit豚鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌磷化EGF應(yīng)答因子1抗體Human FOXP2 ELISA Kit豚鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物(LPO)免疫試劑盒
短密青霉β抗體Human FNTB ELISA Kit豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒
黑曲霉磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體Human FOSL2 ELISA Kit豚鼠肝生長因子(HGF)免疫試劑盒
香菇ARF鳥苷交換因子BIG1抗體Human FN3K ELISA Kit豚鼠甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒
黑曲霉腦特異性同源蛋白BSX抗體Human FIP1L1 ELISA Kit豚鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)免疫試劑盒
釀酒酵母鋅指蛋白47抗體Human FIGNL1 ELISA Kit豚鼠鈣調(diào)(CAM)免疫試劑盒
梨輪紋病菌?BTBD14A蛋白抗體Human FIS1 ELISA Kit豚鼠端粒(TE)免疫試劑盒
多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα2抗纖溶試劑盒去氧穿心蓮內(nèi)酯
苜蓿中華根瘤菌Sinorhizobium│meliloti 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα2巨球蛋白試劑盒羥基芫花
絲核菌屬Rhizoctonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRα2-HS糖蛋白試劑盒7-羥基馬兜鈴A
Ac-VEID-FMK(caspase 6 抑制劑 )北方蜜環(huán) 聚氧化乙烯白介10Elisa
冷溫木拉克酵母 聚氧化乙烯白介11Elisa
乳狀原孢酵母 聚氧化乙烯白介12Elisa
畢赤酵母屬 亞硝酸鈉-15N白介12Elisa
點(diǎn)柄粘蓋牛肝(都不提供) 亞硝酸鈉-15N白介12Elisa
殺鮭氣單胞日本鮭亞種 7-甲氧基-1-萘滿酮白介13Elisa
塔賓曲霉 異鈉白介15Elisa
黑曲霉 反式-(1R,2R)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽白介17Elisa
葡萄汁有孢漢遜酵母 反式-(1S,2S)-2-氨基環(huán)戊鹽酸鹽白介17AElisa
乳酸鏈球 3--4-吡啶白介17FElisa
熱帶假絲酵母 5--2-苯白介18Elisa
厚垣鐮孢 Boc-Arg(Mts)-OH·CHA白介19Elisa
鼠李糖乳桿 3,6-二溴咔唑白介1βElisa
枯草芽孢桿 2--6-氟溴芐白介1受體拮抗劑Elisa
米曲霉 十六烷基基硫酸氫銨白介2Elisa