商品介紹:
LMK-235是一種有效的HDAC抑制劑,可抑制HDAC5,HDAC4,HDAC6,HDAC1,HDAC2,HDAC11和HDAC8的活性,IC50值分別為4.22nM,11.9nM,55.7nM,320nM,881nM,852nM和1278nM,可用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1418033-25-6 純度:99.27% 分子量:294.35 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HDAC抑制劑(LMK-235) | LMK-235 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
嗜熱鏈球菌磷化谷受體1抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit紅生成受體(EPOR)
Aquibacillus halophilus磷化谷受體1抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit紅生成(EPO)
角鱗灰鵝膏菌神經(jīng)束蛋白186抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit紅膜蛋白(EMP)
鐮孢菌磷化泛連接NEDD4-2抗體Human NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit紅激因子(ESF)
泡囊短波單胞菌磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human NID-1(Nidogen-1/Entactin) ELISA Kit橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(sm Actinin-α)
溜曲霉磷化谷受體1抗體Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit亨廷頓相關(guān)蛋白1(HAP1)
酵母菌類固受體激活蛋白2抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit黑瘤衍生亮拉鏈額外核因子(MLZE)
緊密青霉胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit黑色抗體(MC Ab)
枯草芽孢桿菌核小體組裝蛋白1抗體Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit黑色激(MSH)
葡萄座腔菌N-鈣粘附分子抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit黑色濃縮激(MCH)
釀酒酵母核受體輔助抑制因子1抗體Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)
單色革蓋菌腎小球粘附分子受體抗體Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit黑色瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)
鹽古桿菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit黑色瘤活性抑制蛋白(MIA)
蒂莫內(nèi)馬賽菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)
黑芝蛋白激錨定蛋白抗體Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(NFκBp65)
枯草芽孢桿菌絲或半胱蛋白水解抑制蛋白1抗體Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)
同溫層芽孢桿菌Bacillus│stratosphericus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)大黃
海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品大黃
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR大黃
HDAC抑制劑(LMK-235)擬青霉 馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂催產(chǎn)Elisa
畢赤酵母 沙氏葡萄糖瓊脂(USP)催乳Elisa
粗皮側(cè)耳(平菇) 改良甘露卵黃多粘瓊脂基礎(chǔ)睪酮Elisa
金毛殼 2-溴乙氫鹽精氨酸加壓Elisa
根瘤 Todd-Hewitt瓊脂腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子Elisa
Acinetobacter shuensis KEA瓊脂(不含糖)皮質(zhì)酮;腎上腺酮Elisa
枯草芽孢桿 KEA肉湯雄Elisa
蠟狀芽孢桿 靛基質(zhì)試驗(yàn)用培養(yǎng)基游離脂肪酸Elisa
紫桿(可提供) 3-甲基-1,3-丁二總蛋白Elisa
木耳(臺(tái)耳134) 乳酸桿瓊脂培養(yǎng)基褪黑Elisa
嗜鹽動(dòng)性球 pH9.6葡萄糖肉湯雌二Elisa
羅倫氏隱球酵母 苯甲縮5羥色Elisa
中間氣單胞 乳酸桿糖發(fā)酵培養(yǎng)基球蛋白AElisa
殼 改良愛德華瓊脂基礎(chǔ)球蛋白GElisa
米根霉 胰蛋白胨酵母膏葡萄糖肉湯白介1βElisa