商品介紹:
細(xì)胞中的細(xì)胞核是由酸性物質(zhì)組成,它與堿性染料的親和力較強(qiáng);而細(xì)胞漿則相反,它含有堿性物質(zhì)和酸性染料的親和力較大。巴氏染色液利用這一特性對(duì)細(xì)胞進(jìn)行多色性染色,細(xì)胞經(jīng)染色后能清晰地顯示細(xì)胞的結(jié)構(gòu),胞質(zhì)透亮鮮麗,各種顆粒分明,細(xì)胞核染色質(zhì)非常清楚,從而較容易發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。通過(guò)巴氏染色可反映出細(xì)胞在炎癥刺激下和癌變后的形態(tài)學(xué)變化,對(duì)早期發(fā)現(xiàn)和診斷一些病變和腫瘤具有較重要意義。 巴氏染色法是臨床細(xì)胞學(xué)檢查常用的傳統(tǒng)染色方法,在婦科檢查中,巴氏染色細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌及癌前病變的較常用篩查方法。同時(shí)巴氏染色還可觀察女性激素水平和檢測(cè)生殖道病原體如念珠菌、滴蟲(chóng)等的感染。其中EA50染液為EA36的改良型,其操作方法與EA36相同。一般認(rèn)為,EA36和EA50較適用于婦科標(biāo)本,改良EA65染液較常用于非婦科標(biāo)本(如胸、腹水等脫落細(xì)胞)。 儲(chǔ)存條件:室溫密封保存。 有效期:六個(gè)月。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
花錨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Boron solutionG蛋白偶聯(lián)受體RTA蛋白抗體包裝5g
花旗松,二氫槲皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR155蛋白抗體包裝1g
花生紅衣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR30蛋白抗體包裝5g
華北大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper solutionG蛋白偶聯(lián)受體GPR86蛋白抗體包裝500mg
華佩蘭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chromium solutionG蛋白偶聯(lián)受體HM74蛋白抗體包裝25g
化橘紅(柚)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chromium solution樣蛋白1樣蛋白抗體包裝5g
槐定堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chromium solution磷化接頭蛋白Gab 2抗體包裝25g
槐耳菌質(zhì)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cobalt standard磷化接頭蛋白Gab2抗體包裝5g
槐果堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cobalt standard干擾/維誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因抗體包裝1g
槐花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dysprosium standard磷化接頭蛋白Gab 2抗體包裝250mg
槐黃英文名稱: Europium standard多肽N-乙?;肴樘寝D(zhuǎn)移13抗體包裝100g
槐角(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluoride standard銜接蛋白γ/γ1-Adaptin抗體包裝25g
槐角苷;槐屬苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fluoride standard半乳糖瓦爾登轉(zhuǎn)化抗體包裝5g
槐米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gold standard半乳糖凝集10抗體包裝25g
獾油(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Germanium standard半乳糖激2抗體包裝5g
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,可用于培養(yǎng)熱休克蛋白糖蛋白96試劑盒α-蒎烯;α-Pinene
平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP33,可用于培養(yǎng)熱休克蛋白90kDaβ試劑盒蒲公英賽;Taraxerol
ATCC09027=LMG8029=CGMCC1.2421資源名稱: 銅綠假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品熱休克蛋白75 kDa,線粒體試劑盒哌異黃;Scandine
巴氏染色試劑盒(EA65)干酪乳桿 3-乙酰-2,4-二甲基-5乙氧羰基吡咯異質(zhì)性胞核核糖核蛋白KElisa
少根根霉東京變種 (+)-1,4-二-O-芐基-D-蘇糖硫酸軟骨Elisa
類(lèi)阿達(dá)青霉 Nα-苯甲酰-DL-精氨酰-β-萘阿立新BElisa
膠孢 DiOC2(3) [3,3'-Diethyloxacarbocyanine Iodide]晶狀體蛋白αAElisa
田菁根瘤 2-氟-3-甲基吡啶-5-酸CHO宿主蛋白Elisa
橙黃色擲孢酵母 (±)-BOC-A-膦酰基甘氨酸酯,95%鸚鵡衣原體抗體Elisa
嗜糖黃桿 二氯(2-吡啶甲酸)金克氏錐蟲(chóng)抗體Elisa
皺褶假絲酵母 (S)-5-氧代四-3-氨酸芐酯β-羥基丁酸Elisa
托魯斯山鏈霉 2-Dicyclohexylphosphino-2′,4′,6′-triisopropylbiphe血管生成樣蛋白1Elisa
鏈卵屬 氯[2-(二叔丁基磷)二苯基]金谷氨酸脫羧2Elisa
腸沙門(mén)氏腸亞種波那雷恩血清型 1 - (4,4 - 二苯基-3 - 基)- 3 -鹽酸鹽卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白2Elisa
大腸埃希氏桿 2-(4-聯(lián)苯基)-5-苯基-1,3,4-噁二唑角蛋白6BElisa
熒光假單胞 2-氨基-5-溴噻唑-4-甲酸甲酯磷酸核糖焦磷酸酰基轉(zhuǎn)移Elisa
稻平臍蠕孢 單丁基三異辛酸錫相關(guān)血漿蛋白AElisa
北京擲孢酵母 2-氯-D-苯氨酸樁蛋白2Elisa