以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
IKKε-IN-1是IKKε高效選擇性抑制劑,能抑制IKKε介導(dǎo)的IRF3磷酸化,IC50值小于100nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1292310-49-6 純度:98.50% 分子量:457.52 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
抗生溶桿菌皮質(zhì)1抗體Human GLP2(Glucagon Like Peptide 2) ELISA Kit人前列腺E1(PGE1)免疫試劑盒
串珠鐮刀菌8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框70抗體Human GLUT2(Glucose Transporter 2) ELISA Kit人前列腺D合成(PGDS)免疫試劑盒
氧化微桿菌胰羧肽E抗體Human GKN1(Gastrokine 1) ELISA Kit人前列腺D2(PGD2)免疫試劑盒
菌核青霉磷化角蛋白18抗體Human GLUT4(Glucose Transporter 4) ELISA Kit人前列腺A1(PGA1)免疫試劑盒
類芽孢桿菌20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框112抗體Human GM-CSF Ab(Anti-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Antibody) ELISA Kit人前列環(huán)(PGI2)免疫試劑盒
明尼蘇達(dá)被毛孢10號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框88抗體Human Glyoxalase I(GLO1) ELISA Kit人前顆粒蛋白(PGRN)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌富含半胱C端蛋白1抗體Human GNβ1(G Protein Beta 1) ELISA Kit人前膠原C內(nèi)肽增強(qiáng)子1(PCOLCE1)免疫試劑盒
海神弧菌E1A激活基因激蛋白2抗體Human GP-73(Golgi Protein 73) ELISA Kit人前膠原C端肽(PCP)免疫試劑盒
谷棒桿菌壁合成蛋白43抗體Human GDN(Glia Derived Nexin) ELISA Kit人前動(dòng)力蛋白1(PROK1/EG-VEGF)免疫試劑盒
茯苓19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體Human GH2(Growth Hormone 2) ELISA Kit人前病整合位點(diǎn)1(Pim1)免疫試劑盒
運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌*磷化p21蛋白抗體Human GHAb(Anti-Growth Hormone Antibody) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)免疫試劑盒
短裙竹蓀東北變種*磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激2抗體Human GPⅡb/Ⅲa(Plaet Membrane Glycoprotein Ⅱb/Ⅲa complex) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(GLUT3)免疫試劑盒
金黃殼囊孢磷化鈣/鈣調(diào)依賴蛋白激2α抗體Human GHITM(Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein) ELISA Kit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)免疫試劑盒
乳桿菌磷化周期依賴性激2抗體Human GADL1(Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) ELISA Kit人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)免疫試劑盒
長(zhǎng)枝木霉磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體Human GA(Glycated Albumin) ELISA Kit人葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)免疫試劑盒
黑平188磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體Human GABA(Gamma-aminobutyric acid) ELISA Kit人葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒
蛹蟲(chóng)草Cordyceps│militaris 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε試劑盒車葉草苷
蝕脈鐮孢Fusarium│vasinfectum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRB群鏈球菌多糖抗體試劑盒草
柔嫩艾美耳球蟲(chóng)Eimeria│tenella 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCB-淋巴趨化因子1試劑盒橙黃決明-6-葡萄糖苷
IKKε抑制劑(IKK epsilon-IN-1)DNA修復(fù)蛋白R(shí)ad23抗體包裝0.5mg
組織相容性復(fù)合物RTF1抗體包裝100g
核糖核苷還原1抗體包裝25g
環(huán)指蛋白167抗體包裝5g
抵抗抗體包裝25g
Ras特異性嘌呤核苷釋放因子1包裝5g
核糖體S6激RSK2抗體包裝25g
受體激活蛋白激C1抗體包裝5g
孤兒核受體抗體包裝1g
環(huán)指蛋白17抗體包裝5g
呼吸道合胞病抗體包裝100g
周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝25g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝5g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝25g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝5g