以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
我司細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測(cè)細(xì)胞活力與毒性的方法。本產(chǎn)品利用靈敏的易被氧化還原的物質(zhì)通過(guò)在細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的化學(xué)還原反應(yīng),將非熒光信號(hào)的染料轉(zhuǎn)換成為紅色熒光物質(zhì),從而檢測(cè)細(xì)胞的存活率。該熒光信號(hào)可以用530nm 的激發(fā)波激發(fā),在590nm 處可以獲發(fā)射波。檢測(cè)所產(chǎn)生的熒光信號(hào)是與樣品中的活細(xì)胞數(shù)成正比的。根據(jù)不同類型的細(xì)胞,本試劑盒可以檢測(cè)到至少40 個(gè)細(xì)胞/孔,同時(shí)保證很好的重現(xiàn)性和靈敏度。 操作說(shuō)明 以下操作可用作通用指導(dǎo)建議。考慮不同細(xì)胞類型與培養(yǎng)條件的差異性,有必要根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化您的操作步驟。 1.96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔100μL 培養(yǎng)基飼養(yǎng)細(xì)胞,控制細(xì)胞數(shù)目在40~10000 個(gè)/貼壁細(xì)胞,2000~500000 個(gè)/懸浮細(xì)胞。設(shè)置空培養(yǎng)基做對(duì)照。 2.加入10μL 檢測(cè)液至培養(yǎng)基中,37 度避光孵育5-6 小時(shí)。 3.熒光微孔板讀數(shù)530nm 激發(fā),590nm 發(fā)射波讀數(shù)。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員2(TRPV2)英文名稱:TRPV2 ELISA Kit紅2,3 - 二磷甘油合成抗體包裝1g
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員1(TRPV1)英文名稱:TRPV1 ELISA Kit布氏桿菌菌體蛋白抗體包裝5g
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員4(TRPM4)英文名稱:TRPM4 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝100ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)英文名稱:TGFβI ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝500ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅱ(TGFβR2)英文名稱:TGFβR2 ELISA Kit多聚合苷激3磷化抗體包裝25ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)英文名稱:TGFβR1 ELISA Kit癌易感基因1抗體包裝1ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)英文名稱:TGFβ3 ELISA KitBcl-2同源拮抗劑抗體包裝5ml
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)英文名稱:TGFβ1 ELISA Kitβ3腎上腺能受體抗體包裝1g
主要堿性蛋白(MBP)英文名稱:MBP ELISA Kit腦鈉/利鈉肽抗體包裝5g
軸突生長(zhǎng)誘向因子1(Ntn1)英文名稱:Ntn1 ELISA KitBZW2蛋白抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子2A(CDKN2A)英文名稱:CDKN2A ELISA Kit緩激肽B1受體抗體包裝1g
周期依賴性激抑制因子1A(CDKN1A)英文名稱:CDKN1A ELISA Kit鈣激活通道蛋白α1抗體包裝250mg
周期依賴性激8(CDK8)英文名稱:CDK8 ELISA Kit卵黃狀黃斑病蛋白2抗體包裝5g
重肽鐵蛋白(FTH)英文名稱:FTH ELISA Kit絲/蘇蛋白激SAD-B抗體包裝1g
腫廇蛋白P63(TP63)英文名稱:TP63 ELISA Kit鼻咽癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
去整合樣金屬蛋白19抗體肌肉生長(zhǎng)抑制(MSTN)FRAX597 is a potent, ATP-competitive inhibitor of group I PAKs with IC50 of 8 nM
細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(96孔熒光計(jì))嗜根考克氏 四丁基二氟三苯硅酸銨熱休克70kDa蛋白12B檢測(cè)試劑盒
大豆慢生根瘤 2-乙基己基磷酸單-2-乙基己酯熱休克蛋白10檢測(cè)試劑盒
枝狀枝孢 二硝托熱休克蛋白47檢測(cè)試劑盒
南印度站游動(dòng)球 5-氟-2-酸熱休克蛋白60檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)氣莢膜梭 素C型 2-氨基-5-溴-2'-氟二苯甲酮熱休克蛋白70檢測(cè)試劑盒
棉花枯萎 3,3-二氟吡咯烷鹽酸鹽熱休克蛋白72檢測(cè)試劑盒
榛色鏈霉 4-氯-4-氧丁酸乙酯熱休克蛋白90檢測(cè)試劑盒
熱帶假絲酵母 4-氨基-3-三氟甲苯人磷酸化的H2AX抗體檢測(cè)試劑盒
蘇云金芽孢桿 1,4-二-2-氟苯特異性β1糖蛋白檢測(cè)試劑盒
固氮 對(duì)乙氧基苯甲酰氯相關(guān)血漿蛋白A檢測(cè)試劑盒
緊縮花褶傘 4-羥甲基四氫吡喃絨毛膜促性腺檢測(cè)試劑盒
束梗鏈格孢 依澤替米貝絨毛膜促性腺β檢測(cè)試劑盒
分枝節(jié)桿 4-甲基磺酰苯酚溶酶檢測(cè)試劑盒
香蕉 2,4-二甲基芐溶酶體相關(guān)膜蛋白2檢測(cè)試劑盒
梭狀芽孢桿 反式-3-羥基肉桂酸溶血補(bǔ)體檢測(cè)試劑盒