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產品規格:100T
發貨周期:1~3天
公司產品僅用于科研
商品介紹:
用途: 流式細胞術檢測細胞凋亡與細胞壞死 注意事項: Hoechst33258能被活細胞攝取,與DNA結合,在紫外線下呈藍色熒光。PI使死細胞著色產生紅色熒光。在散點圖上結果為:正常細胞呈低藍/紅光,凋亡細胞呈高藍/低紅光,壞死細胞呈低藍/高紅光。 儲存條件:-20℃,避光,12個月 |
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調控;
⑤細胞分化及其調控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
糯稻根(標準品)英文名稱: Chlortoluron solutionG蛋白偶聯受體115抗體包裝1g
歐當歸內酯A(標準品)英文名稱: DiuronG蛋白偶聯受體10抗體包裝5g
歐夾竹桃苷(標準品)英文名稱: Clofentezineβ-葡萄糖腦苷脂抗體包裝1g
歐前胡(標準品)英文名稱: Fenuron半乳糖凝集相關蛋白A抗體包裝250mg
藕節(標準品)英文名稱: Daminozide半乳糖凝集12抗體包裝5g
盤龍參(標準品)英文名稱: DEETγ基丁運載蛋白3抗體包裝100g
螃蟹(標準品)英文名稱: TerbumetonGTPIMAP家族成員1抗體包裝25g
胖大海(標準品)英文名稱: ThifluzamideGTPIMAP家族成員2抗體包裝5g
佩蘭(標準品)英文名稱: TsumacideGTPIMAP家族成員3抗體包裝1g
蟛蜞菊內脂;蟛蜞菊內酯(標準品)英文名稱: TerbuthylazineGTPIMAP家族成員4抗體包裝5g
披麻草(標準品)英文名稱: Tri-tert-butylphosphineGTPIMAP家族成員5抗體包裝25g
枇杷葉(標準品)英文名稱: TebufenpyradG蛋白調節誘導神經突增生蛋白2抗體包裝5g
片姜黃(標準品)英文名稱: 1-NaphthaleneacetamideGTPIMAP家族成員7抗體包裝1g
平貝母(標準品)英文名稱: ThiaclopridGTPIMAP家族成員8抗體包裝25g
坡模-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯英文名稱: Tricyclazol solutionG蛋白調節誘導神經突增生蛋白1抗體包裝5g
細腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質量規格:>98%,標準品牛小腸堿性磷試劑盒沒食子酯;Propyl gallat
白靈菇Pleurotus│nebrodensis 質量規格:>98%牛奶過敏原特異性IgE抗體芒果苷;Mangiferin
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質量規格:>99%,USP34,BR,可用于培養牛兒基焦磷合試劑盒沒食子;Gallic acid
Hoechst33342/PI細胞凋亡染色試劑盒朱紅鏈霉 3-氯喹啉H1N1流感IgA抗體Elisa
煙曲霉 (R)-5-溴甲基-2-吡咯烷酮H1N1流感IgG抗體Elisa
越桔假絲酵母 反式-4-(4-基環己基)苯H1N1流感IgM抗體Elisa
巨孢毛霉 2-硝基-5-氯H3N2流感IgA抗體Elisa
兩型孢毛霉 2,4-二氯-5-甲氧基苯H3N2流感IgG抗體Elisa
扣囊復膜孢酵母 苯-2,5-二磺酸H3N2流感IgM抗體Elisa
黑曲霉 苯并呋喃-2-酸尿囊Elisa
大腸埃希 4-(Boc-氨基)吡啶半乳糖凝集3Elisa
枯草芽孢桿 BOC-D-3-(3-吡啶基)-氨酸嗅覺受體1J1Elisa
溜曲霉 2,6-二氯-4-吡啶奧曲肽Elisa
球孢白僵 Estradiol valerate整合α4β1Elisa
金針菇F5 2'-羥基苯酮羧肽A4Elisa
鼠李糖乳桿 替考拉寧酪氨酸蛋白激受體A4Elisa
膠囊青霉 4-羥基鄰苯二甲酸低密度脂蛋白受體相關蛋白4抗體Elisa
深紅酵母 N-BOC-3-氨基環己泛結合E2Elisa
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)