商品介紹:
Aminophylline是競(jìng)爭(zhēng)性非選擇性磷酸二酯酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):317-34-0 純度:99.92% 分子量:420.43 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
粗柄白蘑補(bǔ)體C3cα片段2抗體Human LOX(Lysyl Oxidase) ELISA Kit人特異性β1糖蛋白4(PSG4)免疫試劑盒
球孢白僵菌補(bǔ)體C3cα 鏈片段1抗體Human LIPH(Lipase H) ELISA Kit人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)免疫試劑盒
巴達(dá)維亞芽孢桿菌補(bǔ)體C3dg片段抗體Human MT(Melatonin) ELISA Kit人皰疹抗體(HG)免疫試劑盒
大腸桿菌補(bǔ)體C3g片段抗體Human LOX(Lysyl Oxidase) ELISA Kit人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫試劑盒
鐮刀菌(三七根際土壤)補(bǔ)體C3d片段抗體Human LTA(lipoteichoic acids) ELISA Kit人熱休克蛋白90kDaβ(GRP94),成員1(HSP90B1)免疫試劑盒
魚肉中磺嘧啶、磺甲惡唑質(zhì)控樣品CD28抗體Human LOXL4(Lysyl Oxidase Like Protein 4) ELISA Kit人熱休克蛋白75 kDa,線粒體(TRAP1/HSP75)免疫試劑盒
Rhizobiales sp.F肌動(dòng)蛋白α2亞基抗體Human LpPLA2(Phospholipase A2, Lipoprotein Associated) ELISA Kit人熱休克蛋白72(HSP-72)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌亞麻專化型環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體Human LTA4H(Leukotriene A4 Hydrolase) ELISA Kit人熱休克蛋白70(HSP-70)抗體免疫試劑盒
植物內(nèi)芽孢桿菌胱抑A/半胱蛋白抑制劑A抗體Human LACTβ(β-Lactamase) ELISA Kit人熱休克蛋白22(HSP-22)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌庫爾斯塔克亞種氯離子通道蛋白27抗體Human LAMA4(Laminin Alpha 4) ELISA Kit人熱穩(wěn)定抗原(HSA/CD24)免疫試劑盒
黃曲霉緊密連接蛋白8抗體Human LAT(Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit人缺血修飾白蛋白(IMA)免疫試劑盒
冬菇磷化半胱蛋白9抗體Human IgG3(Immunoglobulin G3) ELISA Kit人犬尿(KYN)免疫試劑盒
屎腸球菌磷化分裂周期蛋白25B抗體Human IgG4(Immunoglobulin G4) ELISA Kit人脫氫7家族,成員A1(ALDH7A1)免疫試劑盒
短小芽孢桿菌 更名不慌供應(yīng)磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體Human IL10Rβ(Interleukin 10 Receptor Beta) ELISA Kit人糖還原(AR)免疫試劑盒
絨邊膠盤孢磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體Human IL-13(Interleukin 13) ELISA Kit人縮(ALD)免疫試劑盒
大豆擬莖點(diǎn)種腐病菌磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑抗體Human IL-17A(Interleukin 17 A) ELISA Kit人固(ALD)免疫試劑盒
灰色鏈霉菌Streptomyces│griseus 質(zhì)量規(guī)格:BRcAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白試劑盒對(duì)羥基肉桂
擬諾卡氏菌屬菌種Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BCCa2+激活K+通道蛋白2試劑盒膽維他
白靈菇Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BCC4結(jié)合蛋白試劑盒達(dá)卡巴
非磷酸二酯酶抑制劑(Aminophylline)RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB7抗體包裝250mg
c-Myc應(yīng)答蛋白抗體包裝1g
RAS癌基因相關(guān)蛋白R(shí)AB6B抗體包裝5g
Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體包裝100g
結(jié)腸癌相關(guān)基因蛋白抗體(resistin-like β)包裝25g
磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體包裝1g
環(huán)指蛋白6抗體包裝5g
核糖核6抗體包裝500g
磷化Ras特異性鳥嘌呤核苷釋放因子1包裝100g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝25g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝500g
磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝5g
磷化原癌基因c-Raf抗體包裝1g
磷化原癌基因c-Raf抗體包裝5g
磷化原癌基因c-Raf抗體包裝25g