PI3K和MLCK活性抑制劑(Wortmannin)公司*的產(chǎn)品：TWIST protein/FITC 熒光標(biāo)記TWIST轉(zhuǎn)錄因子蛋白抗體IgGN-芴氧羰-N'-三苯-D-組氨 98%
Rabbit human Fibrinogen/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記可溶性纖維蛋白原抗體IgGFMOC-L-亮氨五氟苯酯 98%
Rabbit human Fibrinogen/FITC 熒光標(biāo)記

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：PI3K和MLCK活性抑制劑(Wortmannin)

英文名稱：Wortmannin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調(diào)控；

⑤細胞分化及其調(diào)控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

枯草芽孢桿菌1號染色體開放閱讀框192抗體Human PEX2(Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit人食欲/阿立新B(OX-B)免疫試劑盒

凍干補體1號染色體開放閱讀框194抗體Human PDE4D(Phosphodiesterase 4D, cAMP Specific) ELISA Kit人生長抑(SS)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌1號染色體開放閱讀框198抗體Human PDIA2(Protein Disulfide Isomerase A2) ELISA Kit人生長激釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)免疫試劑盒

Paenibacillus1號染色體開放閱讀框21抗體Human PDIA3(Protein Disulfide Isomerase A3) ELISA Kit人生長激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒

大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框216抗體Human PCDHβ16(Protocadherin Beta 16) ELISA Kit人生長激結(jié)合蛋白(P)免疫試劑盒

大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框43抗體Human PCDHγA2(Protocadherin Gamma A2) ELISA Kit人生長激(GH)免疫試劑盒

大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框50抗體Human PDIA5(Protein Disulfide Isomerase A5) ELISA Kit人生長分化因子-9(GDF-9)免疫試劑盒

黃硬皮馬勃1號染色體開放閱讀框49抗體Human PCI(Protein C Inhibitor) ELISA Kit人生長分化因子3(GDF3/UNQ222/PRO248)免疫試劑盒

柱孢綠僵菌1號染色體開放閱讀框53抗體Human PCIII(Procollagen III) ELISA Kit人生長分化因子2(GDF2)免疫試劑盒

美麗胡枝子根瘤菌1號染色體開放閱讀框54抗體Human PDK4(Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) ELISA Kit人生長分化因子15(GDF15)免疫試劑盒

棉阿舒囊霉1號染色體開放閱讀框55抗體Human PDI(Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit人生長調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)免疫試劑盒

綠色木霉1號染色體開放閱讀框56抗體Human PDIA6(Protein Disulfide Isomerase A6) ELISA Kit人腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)免疫試劑盒

大腸埃希菌1號染色體開放閱讀框65抗體Human PCNA(ProlifeRating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit人腎損傷分子1(Kim-1)免疫試劑盒

釀酒酵母1號染色體開放閱讀框64抗體Human ON(Osteonectin) ELISA Kit人腎前體免疫試劑盒

弓形蟲(GTS－2株)1號染色體開放閱讀框69抗體Human OTR(Oxytocin Receptor) ELISA Kit人腎(Renin)免疫試劑盒

灰樹花-41號染色體開放閱讀框77抗體Human NRG-2(Neuregulin 2) ELISA Kit人腎上腺髓質(zhì)前體(Pro-ADM)免疫試劑盒

曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BCCD209分子試劑盒γ-倒捻子

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BCCD19分子試劑盒扁豆堿

: NRRLB-24209=JCM12669=DSM44594資源名稱: Amycolatopsisdecaplanina 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRCD15分子試劑盒冬凌草乙
PI3K和MLCK活性抑制劑(Wortmannin)山茶 馬尿酸鈉肌球蛋白輕鏈激Elisa

大腸埃希 5-己炔酸色氨酸羥化2Elisa

盤多毛孢屬 2,4,6-三苯肼胰島樣生長因子Elisa

食砜節(jié)桿 柯衣定蛋白ZElisa

松生莖點霉 Boc-4-甲氧基-L-苯氨酸CXC趨化因子配體12Elisa

煙管 4--3-硝苯抗凝血Elisa

大腸埃希氏 H-Sar-NH2·HCl5羥色2BElisa

果生鏈核盤 1,2-乙烷基二磺酸鈉Artemin蛋白Elisa

大腸埃希氏(大腸桿) 銀硬脂酰去飽和Elisa

弗氏假絲酵母 2,2'-二萘細小病抗體Elisa

耶特鏈霉 N-[(基硅)甲基]芐麻疹病Elisa

根瘤屬 1-(3-)哌瘟熱病Elisa

糖化酵母 3,3'-二基硫雜二羰花青化物父系表達基因2Elisa

類干酪乳桿 二(三-t-丁基膦)鈀(0)游離氨基酸Elisa

扶桑本森頓酵母 6-氨基富含半胱氨酸型酸性蛋白Elisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)