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詳細介紹
商品介紹：
本試劑盒應用范圍廣，可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。 細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒（Alexa Fluor 647）可以用來檢測組織細胞在凋亡晚期過程中細胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入Alexa Fluor 647-12-dUTP，從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。Alexa Fluor 647為紅色熒光染料，具有很高的穩定性和很強的亮度。 試劑盒組份： 5×Equilibration Buffer——————————1.25 ml Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix———100 μl Recombinant TdT Enzyme——————————20 μl Proteinase K(2 mg/ml)———————————40 μl 注意事項 1) 需自備用于洗滌細胞的PBS，用于封片的抗熒光淬滅封片液，用于固定的4%多聚。 2) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 儲存條件：-20℃，有效期一年。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647) | 20 rxn | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
上皮中性粒細胞激活肽78(ENA78)英文名稱：ENA78 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白25抗體包裝500mg
上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)英文名稱：CDHE ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白28A抗體包裝1g
上皮型脂肪結合蛋白(FABP5)英文名稱：FABP5 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白28B抗體包裝5g
殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)英文名稱：BPI ELISA Kit腫瘤/抗原74抗體包裝1g
色胺羥化2(TPH2)英文名稱：TPH2 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白38抗體包裝25g
色胺羥化1(TPH1)英文名稱：TPH1 ELISA Kit7號染色體開放閱讀框72抗體包裝5g
三葉因子3(TFF3)英文名稱：TFF3 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白42抗體包裝100g
三葉因子2(TFF2)英文名稱：TFF2 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白47抗體包裝25g
三肽基肽Ⅰ(TPP1)英文名稱：TPP1 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白43抗體包裝5g
三磷腺苷(ATP)英文名稱：ATP ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白46抗體包裝1g
三磷肌(IP3)英文名稱：IP3 ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白63抗體包裝1g
朊病毒蛋白(PRNP)英文名稱：PRNP ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白54抗體包裝5g
軟骨關聯蛋白(CRTAP)英文名稱：CRTAP ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白61抗體包裝100ml
軟骨寡聚基質蛋白(COMP)英文名稱：COMP ELISA Kit卷曲螺旋結構域蛋白8抗體包裝25ml
乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)英文名稱：MFGE8 ELISA Kit神經酰激CERK抗體包裝100g
: AS3.2783資源名稱: 泡盛曲霉 質量規格：純度> 98%,BR，可用于培養轉化生長因子β激蛋白22試劑盒紫檀芪;Pterostilbene
平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質量規格：HPLC>98%,標準品轉化生長因子β3試劑盒竹節參皂苷IVa;Chikusetsu
普通變形桿菌Proteus│vulgaris 質量規格：純度>98%,BR,可用于培養轉化生長因子β2試劑盒梓酚;Catalponol
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 647)枯草芽孢桿 2,3-二羥基萘-6-磺酸鈉血管內皮生長因子受體1Elisa
釀酒酵母 雙氯芬酸血管內皮生長因子受體2Elisa
枯草芽孢桿 2-氨基-4-溴甲酯血管內皮粘附分子1Elisa
熱帶假絲酵母 一氯頻哪酮血管內皮抑Elisa
溜曲霉 2-氨基-3-溴吡啶血管黏附蛋白Elisa
棲藻海桿狀 3-基甲酯血管生成1Elisa
西蕃蓮莖基腐病 (S)-(-)-Alpha-氨基-Gamma-丁內酯鹽血管生成2Elisa
芽孢桿 高氯酸鎳(II)六水合物, Reagent Grade血管生成受體酪氨酸激2Elisa
山柑芽孢桿 Fmoc-L-正纈氨酸血管生成樣蛋白2Elisa
假單胞屬 2-甲基-4-硝基吡啶血管生成樣蛋白3Elisa
繩狀籃狀 2-苯甲酰噻吩血管生長Elisa
Bacillus 氯(4-)苯血管性血友病因子Elisa
金針菇—HP3 六水合磷酸鎂銨血紅蛋白Elisa
黑孢霉 酸鎳六水合物血紅蛋白CElisa
大腸埃希 氯化釹六水合物血紅蛋白FElisa
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