詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
K-115 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
K-115是一高效選擇性ROCK激酶抑制劑,IC50值為31nM,臨床2期。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:887375-67-9 別名:Ripasudil 純度:98.38% 分子量:395.88 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
煙芽孢桿菌TH糖蛋白抗體Anti-LY9 Antibody神經鈣蛋白δ(NCALδ)
釀酒酵母紡錘體和著絲粒相關蛋白1抗體Anti-LYZ Antibody(PB0703)神經蛋白聚糖(NCAN)
淡黃濕傘轉錄輔助因子退變樣蛋白3抗體Anti-MAD1L1 Antibody(PB0258)神經(NEU)
球孢枝孢轉錄輔助因子退變樣蛋白1抗體Anti-MADCAM1 Antibody伸展蛋白(SNPH)
釀酒酵母病抑制蛋白Viperin抗體Anti-MAD2L1 Antibody攝食抑制因子1(NES1)
黃曲霉血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體Anti-MAdCAM1 Antibody上皮中性粒激活肽78(ENA78)
奇雄腐霉血管內皮生長因子B167Anti-MAFA Antibody上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)
奧氏蜜環菌血管內皮生長因子BAnti-MAF Antibody上皮型脂肪結合蛋白(FABP5)
地衣芽孢桿菌01群稻葉型霍亂弧菌抗體Anti-MAFA Antibody上皮粘附分子(EPCAM)
云芝栓孔菌 (變色栓菌)血管抑制蛋白1抗體Anti-MAG Antibody上皮基質相互作用蛋白1(EPSTI1)
多汁乳菇V5 tag標簽抗體Anti-MAG Antibody上池蛋白(SBSN)
TardiphagaVSV-G tag標簽抗體Anti-MAK Antibody殺傷凝集樣受體亞家族C成員2(KLRC2)
溶淀粉類芽孢桿菌血管內皮生長因子抗體Anti-MAG Antibody殺傷凝集樣受體亞家族A成員1(KLRA1)
彎孢腺苷環化激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體Anti-MAOA Antibody殺傷免疫球蛋白樣受體3DL1(KIR3DL1)
產紫青霉囊泡對接蛋白p115抗體Anti-MALT1 Antibody殺傷免疫球蛋白樣受體2DS4(KIR2DS4)
球孢白僵菌血管內皮生長因子AAnti-MAOB Antibody殺傷蛋白(KLLN)
絲/蘇蛋白激Sgk3抗體致瀉大腸埃希氏菌大鼠卵巢顆粒細胞
轉錄因子sox9a抗體微桿菌屬大鼠卵巢成纖維細胞
清道夫受體B2抗體暗色環紋炭團菌(斜面)大鼠子宮內膜上皮細胞
應激誘導磷蛋白1抗體Sphingomonaskoreensis大鼠淋巴成纖維細胞
ROCK激酶抑制劑(K-115)金龜子綠僵 硫酸鋅催乳Elisa
多正青霉 2,3-二氨基萘膽固7α羥化Elisa
Achromobacter insolitus 西米替汀低密度脂蛋白受體Elisa
立枯絲核 N-間氧基芐基-9順-油酸酰淀粉Elisa
雜色曲霉原變種 N-(3-甲氧基芐基)十六碳酰多巴Elisa
枯草芽孢桿 N-間氧基芐基-9順,12順-亞油酸酰芳香化Elisa
釀酒酵母 N-芐基-9順-油酸酰酚氧化Elisa
季也蒙畢赤酵母 瑪卡酰B睪酮Elisa
青黃馬杜拉放線 N-芐基-9順,12順-亞油酸酰谷氨酸脫氫Elisa
瘍殼孢屬 1-(2,6-二)羥骨鈣Elisa
芽胞桿屬 3-丁酸固調節元件結合蛋白1Elisa
Bacillus tequilensis 鹽酸金霉果糖-1,6-二磷酸Elisa
大腸埃希氏 5-羥基色氨酸(5-HTP)果糖-6-磷酸激Elisa
黑曲霉 正癸酸過氧化物體增殖物激活受體αElisa
長柄平菇 醋酸潑尼松過氧化脂質;乳過氧化物Elisa