公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:c-Raf抑制劑(GW 5074)
英文名稱:GW 5074
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
GW5074是一種有效的,選擇性的c-Raf抑制劑,IC50值為9nM;對JNK1/2/3,MEK1,MKK6/7,CDK1/2,c-Src,p38MAP,VEGFR2或c-Fms等沒有作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:220904-83-6 純度:98.77% 分子量:520.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
彎梗根霉絲/蘇激受體相關(guān)蛋白抗體Anti-LSM5 Antibody神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)
擬青霉線粒體輔色C還原核心蛋白2抗體Anti-LRTOMT Antibody神經(jīng)束蛋白(NFASC)
短密青霉未分化胚胎干轉(zhuǎn)錄因子1抗體Anti-LSM7 Antibody神經(jīng)上皮轉(zhuǎn)化基因1(NET1)
黑曲霉尾加壓2抗體Anti-LTA Antibody神經(jīng)軟骨蛋白(NCDN)
麥芽糖假絲酵母尾加壓2相關(guān)肽抗體Anti-LSM8 Antibody神經(jīng)連接蛋白3(NLGN3)
皺孢鏈霉菌荊豆凝集1抗體Anti-LTA Antibody神經(jīng)連接蛋白2(NLGN2)
普通變形桿菌泛相關(guān)蛋白1抗體(鼻咽癌相關(guān)基因20蛋白)Anti-LTBR Antibody神經(jīng)連接蛋白1(NLGN1)
哈茨木霉廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體Anti-LTF Antibody神經(jīng)顆粒(NRGN)
紫紅曲霉泛D抗體Anti-LTK Antibody神經(jīng)介U(NMU)
環(huán)帶擬盤多毛孢珠蛋白抗體Anti-LUM Antibody神經(jīng)介S(NMS)
桔青霉尿卟啉原脫羧抗體Anti-LUM Antibody神經(jīng)介N(NMN)
嗜松青霉磷化信號淋巴活化分子CD150抗體Anti-LUM Antibody(PB0701)神經(jīng)介B(NMB)
薄花邊傘2-1泛激活2B抗體Anti-LY6A Antibody神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(GLDN)
擴(kuò)展青霉ATP-依賴的RNA解旋p47抗體Anti-LYN Antibody神經(jīng)降壓受體2(NTSR2)
鐮刀菌等上游激因子1抗體Anti-LY6C Antibody神經(jīng)激肽A(NKA)
串珠鐮刀菌*泛化組蛋白H2AX抗體Anti-LYZ Antibody神經(jīng)鈣黏蛋白(CDH2)
中斷位點(diǎn)蛋白STIL抗體水生異常球菌大鼠子宮頸上皮細(xì)胞
紡錘體組裝異常蛋白6抗體毛霉屬(斜面)大鼠子宮平滑肌細(xì)胞
減數(shù)分裂重組蛋白SPO11抗體殺鮭氣單胞菌大鼠卵巢上皮細(xì)胞
Smad蛋白E3泛連接1抗體梭形芽孢桿菌大鼠子宮成纖維細(xì)胞
c-Raf抑制劑(GW 5074)短小芽孢桿 碳酸鋇補(bǔ)體蛋白3Elisa
香栓孔 三氧化銻補(bǔ)體蛋白4Elisa
構(gòu)巢曲霉 N-乙酰苯肼超敏C反應(yīng)蛋白Elisa
煙色血革 硫酸鈦超氧化物歧化Elisa
硬結(jié)節(jié)桿 硫酸鈰垂體腺苷酸環(huán)化激活肽Elisa
桔橙鏈霉 氧化鋯雌二Elisa
黃曲霉 鉛粉雌Elisa
巴氏醋桿 十一烯酸雌受體Elisa
大腸埃希 草酸促甲狀腺Elisa
發(fā)酵乳桿* 硬脂酸鋅促甲狀腺釋放Elisa
葡萄座腔 乙酸鋅促卵泡Elisa
氧化節(jié)桿 磷酸二氫鋅促腎上皮質(zhì)釋放Elisa
白色假絲酵母 磷酸鋅促腎上腺皮質(zhì)Elisa
植物乳桿 堿式碳酸鋅促性腺釋放Elisa
膠孢 氧化鋅催產(chǎn)Elisa