以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
BMI-1抑制劑(PTC-209) | PTC-209 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PTC-209是一種特異性的BMI-1抑制劑,在GEMS受體和ELISA檢測(cè)中,IC50為0.5μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):315704-66-6 純度:99.98% 分子量:495.19 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
糙孢曲霉干擾調(diào)節(jié)因子3Human SAMD9L ELISA Kit植物維生D2(VD2)免疫試劑盒
鏈格孢磷化干擾調(diào)節(jié)因子3Human SAMHD1 ELISA Kit植物維生D(VD)免疫試劑盒
貝形側(cè)耳、鷹翅菌干擾調(diào)節(jié)因子7抗體Human SACM1L ELISA Kit植物維生C(VC)免疫試劑盒
考克氏菌磷化干擾調(diào)節(jié)因子7抗體Human S100A5 ELISA Kit植物維生B6(VB6)免疫試劑盒
構(gòu)巢曲霉磷化胰島受體底物-1抗體Human S100A3 ELISA Kit植物維生B12(VB12)免疫試劑盒
產(chǎn)棒桿菌磷化胰島受體底物-1抗體Human SAMHD1 ELISA Kit植物維生A(VA)免疫試劑盒
核盤菌磷化胰島受體底物-1抗體Human NEFL(Neurofilament light polypeptide) ELISA Kit植物茄呢磷2,葉綠體(SPS2/SPPS)免疫試劑盒
土壤成對(duì)桿菌磷化胰島受體底物-1抗體Human SACM1L ELISA Kit植物茄呢磷1(SPS1/SPPS/SPS)免疫試劑盒
球毛殼磷化胰島受體底物-1抗體Human S100A5 ELISA Kit植物激脫落(ABA)免疫試劑盒
炭疽臟器抗原(液體)磷化胰島受體底物-1抗體Human SAFB ELISA Kit植物活性氧(ROS)免疫試劑盒
假單胞菌屬白介28B抗體Human RUNDC3A ELISA Kit植物環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
褐頂環(huán)柄菇即刻早期應(yīng)答基因2蛋白抗體Human ABCC1(Multidrug resistance-associated protein 1) ELISA Kit植物環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒
大豆 大豆轉(zhuǎn)基因成分(陽性) 三磷肌抗體Human SAFB2 ELISA Kit植物花生四烯(AA)免疫試劑盒
釀酒酵母白介18結(jié)合蛋白抗體Human RUFY2 ELISA Kit植物過氧化氫2(CAT2/CAT)免疫試劑盒
土壤三線鐮孢草酰琥珀脫羧抗體Human RYK ELISA Kit植物鈣調(diào)(CaM)免疫試劑盒
黑曲霉IgLON家族蛋白5抗體Human ZFHX3(Zinc finger homeobox protein 3) ELISA Kit植物L(fēng)-抗壞血過氧化物3,過氧化物病(APX3)免疫試劑盒
南海海棲菌Oceanicola│nanhaiensis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%地膚子皂苷Ic
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%菊苣
蟬棒束孢Isaria│cicadae 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%3-異倒捻子
BMI-1抑制劑(PTC-209)薄層屬 1H,1H,2H,2H-全氟癸基三乙氧基硅烷糜蛋白Elisa
西唐氏鏈霉 蟾蜍甘油三酯Elisa
黑曲霉 α-己基肉桂谷轉(zhuǎn)氨Elisa
*灰葡萄孢 4-吡啶-3-甲酸膽固Elisa
熒光假單胞 (S)-(+)-4-芐基-3-酰-2-惡唑烷酮谷草轉(zhuǎn)氨Elisa
大腸埃希氏 二苯并噻吩砜球蛋白Elisa
擴(kuò)展短桿 4-氨基-4'-硝基二苯基硫超氧化物歧化Elisa
硬結(jié)桿 硫酸釹(III) 水合物谷轉(zhuǎn)氨Elisa
糖化酵母 (2S,3R)-(+)-2-氨基-3-羥基-4-甲基戊酸過氧化氫Elisa
釀酒酵母 1-十二烷基磺酰堿性磷酸Elisa
根瘤 (S)-1-Boc-3-羥基吡咯烷孕Elisa
孟氏假單胞 化鋅基質(zhì)金屬蛋白抑制劑-1Elisa
芍藥枝孢霉 1-Boc-3-吡咯烷酮基質(zhì)金屬蛋白抑制劑-2Elisa
Lysinibacillus xylanilyticus 化釓(III)腎上腺Elisa
齒孢青霉 鉺標(biāo)準(zhǔn)溶液吡啶諾琳Elisa