以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
英文名稱:Staurosporine 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg Staurosporine是一種有效的蛋白激酶抑制劑,作用于PKC,PKA,c-Fgr和磷酸化酶激酶,IC50分別為6nM,15nM,2nM和3nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:62996-74-1 別名:Antibiotic AM-2282;STS;AM-2282 純度:99.98% 分子量:466.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
球孢白僵菌克侖特羅/抗體Human α1-AT(Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit人角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌斯氏亞種6號染色體開放閱讀框151抗體Human α2-AP(α2-Antiplasmin) ELISA Kit人角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌15號染色體開放閱讀框52抗體Human αHSP(Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein) ELISA Kit人間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒
嗜鹽擬諾卡氏菌2號染色體開放閱讀框89抗體Human β-actin(Beta actin) ELISA Kit人間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒
瘦弱鹽扁平菌BCL10結合蛋白和激活核轉錄因子抗體Human ACP(Acid phosphatase) ELISA Kit人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒
相思根瘤菌凋亡加強結構域蛋白15抗體Human MBP(myelin basic protein) ELISA Kit人性T淋巴相關抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA Kit人相關蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒
米曲霉13號染色體開放閱讀框38抗體Human AA(Arachidonic Acid) ELISA Kit人相關蛋白A(CagA)免疫試劑盒
白僵菌14號染色體開放閱讀框140抗體Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit人凋亡相關斑點樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒
溶壁(lywallzyme)陽離子轉運調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) ELISA Kit人硒結合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌15號染色體開放閱讀框62抗體Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌15號染色體開放閱讀框41抗體Human VIL1(Villin 1) ELISA Kit人戊型肝炎病抗體(IgM)免疫試劑盒
大腸埃希菌環(huán)核苷陽離子通道蛋白α2抗體Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit人戊型肝炎病抗體(IgG)免疫試劑盒
宋氏志賀氏菌鈣連蛋白抗體Human τPK1(Tau-Protein Kinase) ELISA Kit人戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒
恥垢分枝桿菌二氫嘧啶相關蛋白2抗體Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit人舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)免疫試劑盒
深綠木霉色P450ⅡE1抗體Human TPS(Tryptase) ELISA Kit人五聚3(PTX3)免疫試劑盒
綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRDickkopf 3試劑盒格列喹
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:BRDickkopf 1試劑盒格列齊特
頂孢霉屬Acremonium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BCDicer-1 枸橘苷
蛋白激酶抑制劑(Staurosporine)葡萄座腔 3-溴-2-基吡啶整合αVβ3Elisa
厚白盤革 6-馬來酰亞丁酸整合連接激Elisa
黑腐皮殼 2-溴-3--5-酸正常T表達和分泌因子Elisa
球孢白僵 仲丁基酸脂蛋白aElisa
皺褶青霉 6-溴吡啶-2-酸頻哪酯脂蛋白磷脂A2Elisa
枯草芽孢桿 1,3-苯二酸脂蛋白脂Elisa
麥芽糖假絲酵母 4-正丁基苯酸脂多糖Elisa
大耳霉 4-正丁氧基苯酸脂多糖結合蛋白Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 4-頻哪酯脂多糖抗體Elisa
黑曲霉 4-(溴甲基)苯酸脂肪甘油三酯脂Elisa
巨型艾美耳球蟲 4-(芐氧基羰基)苯酸脂肪Elisa
堆形艾美耳球蟲 3-丁氧基苯酸脂肪酸合成Elisa
芽孢桿屬 3-丁氧基苯酸脂肪酸脫氫Elisa
樟疫霉 3-(溴甲基)苯酸脂褐質(zhì)Elisa
蘇云金芽孢桿日本亞種 聯(lián)酸新戊二酯脂聯(lián)Elisa