以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
溴化乙錠EB染色試劑盒 | Cell Apoptosis Ethidium Bromide Detection Kit | 100T | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
溴化乙啶(Ethidium Bromide EB)是一種DNA 結(jié)合性熒光色素,其激發(fā)波長(zhǎng)510nm。發(fā)射波長(zhǎng)595nm。產(chǎn)生桔紅色熒光。 EB 不具有膜通透性,不能透過活細(xì)胞膜,只能染死細(xì)胞,因此用EB 單染時(shí),正常細(xì)胞不著色,早期凋亡細(xì)胞呈微弱桔紅光,晚期凋亡細(xì)胞桔紅色熒光增強(qiáng)。死細(xì)胞呈強(qiáng)桔紅光。EB 常與橙合用雙染進(jìn)行凋亡檢測(cè),與橙雙染時(shí),正常細(xì)胞中EB 不能透膜著色,而橙可透過細(xì)胞膜,使細(xì)胞呈綠色均勻熒光,細(xì)胞圓形均勻;而在凋亡細(xì)胞中,細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)凝聚、固縮或斷裂,出芽,凋亡小體形成。染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色顆粒;而壞死細(xì)胞被EB 染成桔紅色,由此熒光顏色和細(xì)胞形態(tài)可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。 儲(chǔ)存:2-8℃,避光,有效期12個(gè)月。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
當(dāng)歸尾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chromium(III) potassium sulfate, dodecahydrateFAM102B蛋白抗體包裝5g
當(dāng)歸酰基戈米辛H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chromium(III) sulfate, hydrateFAM104B蛋白抗體包裝100g
當(dāng)歸酰基戈米辛O英文名稱: Chromotrope FB腎癌下調(diào)蛋白1抗體包裝25g
當(dāng)藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chrysophenine凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體包裝5g
當(dāng)藥黃英文名稱: Cinnamamide胎盤葉受體蛋白2抗體包裝1g
黨參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cinnamon oilFAM13B1蛋白抗體包裝5g
黨參炔苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Citral巖藻糖轉(zhuǎn)移8抗體包裝5g
德爾塔林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Citrazinic acid卵泡激結(jié)合蛋白1抗體包裝100g
燈臺(tái)葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cobalt (II) oxalate相互作用蛋白FHL2抗體包裝25g
燈心草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Concanamycin A脂肪去飽和1抗體包裝5g
燈心草酚英文名稱: Copper(I) bromide回腸脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝100g
燈盞細(xì)辛(燈盞花)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) acetate脂肪型脂肪結(jié)合蛋白包裝25g
地奧司明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) bromide脂肪酰還原2抗體包裝250mg
地膽草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) citrate, hydrate脆性X相關(guān)蛋白樣2抗體包裝50mg
地膚子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Copper(II) hydroxide脂肪酰解2抗體包裝100g
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體試劑盒羥基茜草;Purpurin
死谷芽孢桿菌Bacillus│vallismortis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR神經(jīng)生長(zhǎng)因子前體試劑盒榿木;Alnusone
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%神經(jīng)生長(zhǎng)因子試劑盒喬松;Pinocembrin
溴化乙錠EB染色試劑盒大腸埃希氏桿 Sulforhodamine 101木糖基轉(zhuǎn)移Elisa
解淀粉芽孢桿 Gabapentin HCl巖藻糖糖基轉(zhuǎn)移Elisa
根癌土壤桿 Bradykinin triacetate salt生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2Elisa
擬枝孢鐮孢 α-內(nèi)啡肽蛋白激活亞基1Elisa
葡萄汁有孢漢遜酵母 NeurotensinEB病核抗原1Elisa
復(fù)輪生小克銀漢霉 Trichostatin AEB病核抗原2Elisa
廣島鏈霉 Ala-Ala-AlaEB病衣殼抗原Elisa
釀酒酵母 α-Melanocyte stimulating hormone轉(zhuǎn)谷氨酰2Elisa
尖孢鐮孢 BRL-54443TM4SF19Elisa
平菇 Laropipran-IGFBP-4Elisa
密歇根棍狀桿標(biāo)記亞種 Gabexate MesylateCT-IGFBP-4Elisa
戊糖片球 WZ811TNFSF10Elisa
Priceomyces sp. 1-Pyrenebutyric hydrazideTRIM55蛋白Elisa
阿姆斯特丹曲霉 Nutlin-3紅胰島受體酪氨酸蛋白激Elisa
枯草芽孢桿枯草亞種 URB597二羥基激2Elisa