以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
ML324是JMJD2去甲基酶抑制劑,被證實(shí)有抗病毒作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1222800-79-4 純度:98.19% 分子量:349.43 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
青霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-ST5 Antibody干擾α7(IFNα7)
香菇*Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAM Antibody干擾α6(IFNα6)
雷夫松氏菌PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT1 Antibody干擾α5(IFNα5)
蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT1 Antibody干擾α4(IFNα4)
釀酒酵母APC標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT1 Antibody干擾α21(IFNα21)
枯草芽孢桿菌Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT1 Antibody干擾α2(IFNα2)
遠(yuǎn)青鏈霉菌Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT1 Antibody(PB0539)干擾α17(IFNα17)
卷枝毛霉卷枝變型Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT2 Antibody干擾α16(IFNα16)
日本根霉Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgGAnti-STAT2 Antibody干擾α14(IFNα14)
弗氏檸檬桿菌羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT3 Antibody干擾α13(IFNα13)
石耳*生物標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT4 Antibody干擾α10(IFNα10)
疣孢漆斑菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT3 Antibody干擾α/β受體2(IFNα/βR2)
長(zhǎng)毛木霉FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT2 Antibody干擾α/β受體(IFNα/βR1)
粉紅單端孢霉Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5 Antibody干擾α(IFNα)
新平7317(平菇類)Cy5標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5A Antibody肝脂(LIPC)
大腸埃希氏菌Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5A Antibody肝臟磷果糖激(PFKL)
神經(jīng)內(nèi)分泌肽QRFP抗體細(xì)長(zhǎng)賴芽胞桿菌人胰腺細(xì)胞MatchPair: 胰腺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
RNA結(jié)合蛋白QK1抗體無(wú)色桿菌屬胃壁細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
喹啉磷核糖基轉(zhuǎn)移抗體安達(dá)桿菌屬腎上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
嗜性粒細(xì)胞顆粒關(guān)鍵堿性蛋白抗體副溶血弧菌乳腺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
JMJD2去甲基酶抑制劑(ML324)鏈霉 澤瀉 K 23-醋酸酯
草木樨中華根瘤 11-去氧澤瀉B
蠟樣芽孢桿 1,3,5-三羥基咕噸酮
掘氏疫霉* 1,3,7-三羥基-9H-氧雜蒽-9-酮
黃曲霉 藍(lán)V
果生鏈核盤 13-羥基氧化小檗堿
泡盛曲霉 魯米諾單鈉鹽
櫟生青霉 3-O-阿魏酰奎尼酸
長(zhǎng)柄鏈格孢 二甲苯藍(lán)FF
阿維鏈霉 4-O-阿魏酰奎尼酸
鼠傷寒沙門氏 苦參C
黑木耳 苦參X
硬結(jié)節(jié)桿 7,3'-二羥基-5'-甲氧基異黃酮
金龜子綠僵 苦參E
毛頭鬼傘 cis-宮部苔草酚C