商品介紹:
VX-11e是一種高效的,具有選擇性的ERK抑制劑,Ki值<2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:896720-20-0 純度:98.68% 分子量:500.35 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
ERK抑制劑(VX-11e) | VX-11e | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
普通鏈孢囊菌增食欲B/欲激BAnti-ACSL4 Antibody凋亡相關(guān)因子(Fas)
根瘤菌鳥脫羧抗體Anti-ACSL5 Antibody凋亡相關(guān)蛋白激(DAPK)
厚垣孢普可尼亞菌O位N-乙酰葡萄糖OGT抗體Anti-ACTA1 Antibody凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)
糙皮側(cè)耳、平菇(可訂購)少突膠質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子1Anti-ACTN3 Antibody凋亡蛋白激活因子1(Apaf-1)
副凝聚短狀桿菌陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1抗體Anti-ACTN3 Antibody凋亡蛋白激活因子1(APAF1)
產(chǎn)硫球鏈菌陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-3抗體Anti-ACVR2A Antibody凋亡蛋白活化因子1(APAF-1)
尖鐮孢 黃瓜專化型催產(chǎn)受體(縮宮受體)抗體Anti-ACTN3 Antibody(PB1079)淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結(jié)合家族B成員1(FE65)
黃單胞菌緊密連接蛋白抗體Anti-ACTN4 Antibody淀粉樣前體蛋白(βAPP)
大腸埃希菌卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體Anti-ACVR2B Antibody電子轉(zhuǎn)運黃蛋白-泛醌氧化還原/電子轉(zhuǎn)運黃蛋白脫氫(ETFDH)
樹舌大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體Anti-ADA Antibody電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β肽(ETFB)
相思根瘤菌神經(jīng)叢蛋白B1抗體Anti-ADA Antibody電壓門控通道抗體(VGKC-ab)
狹檐薄孔菌磷化蛋白激C(T410)抗體Anti-ADA Antibody(PB0960)電壓門控通道(VGKC)
產(chǎn)黃纖維單胞菌磷化蛋白激C mu型抗體Anti-ADAM10 Antibody第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)
擬鬼傘磷化蛋白激C mu型抗體Anti-ADAM15 Antibody第10號染色體缺失并與張力蛋白同源的磷(PTEN/MMAC1)
托魯斯山鏈霉菌表面受體PILRβ抗體Anti-ADAM17 Antibody抵抗樣分子β(RELM-β)
斯氏艾美耳球蟲前列腺癌相關(guān)蛋白4抗體Anti-ADAM17 Antibody抵抗(RETN)
成團(tuán)泛菌Pantoea│agglomerans 質(zhì)量規(guī)格:>98%
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
南方鹽單胞菌Halomonas│meridiana 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
ERK抑制劑(VX-11e)聚多曲霉 4-溴-2,6-二纖溶Elisa
蠟樣芽孢桿 含225ml志賀氏増肉湯均質(zhì)袋纖溶原激活物抑制因子1Elisa
枯草芽孢桿 含100mlGN增液均質(zhì)袋纖維蛋白原Elisa
頂孢頭孢霉 含225mlGN增液均質(zhì)袋酰基;膽固酰基轉(zhuǎn)移Elisa
釀酒酵母 含225mlFB1增液均質(zhì)袋心肌肌鈣蛋白ⅠElisa
鏈霉 3-氨基-4-甲酸心鈉Elisa
中國臺灣皮斯克氏酵母 含225mlLB1肉湯均質(zhì)袋血管緊張1-7Elisa
芽胞桿 含225mlmEC+n肉湯均質(zhì)袋血管緊張??Elisa
膜醭畢赤酵母 含225ml3%堿性蛋白胨水均質(zhì)袋血管緊張轉(zhuǎn)化Elisa
假單胞 含100ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋血管內(nèi)皮生長因子受體1Elisa
釀酒酵母 4-氨基-2-血管內(nèi)皮生長因子Elisa
金福菇 含90ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋血管內(nèi)皮粘附分子1Elisa
瓜亡革 含900ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋血管性血友病因子Elisa
奧氏蜜環(huán) 含225ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋血紅氧合1Elisa
雞傷寒沙門氏 4-吡咯烷基吡啶血漿α顆粒膜蛋白Elisa