詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Hoechst 33342染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50ml
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
熒光染料Hoechst 33342 具有一定的細(xì)胞膜透性,能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜,使其染上低藍(lán)色。Hoechst33342 可以用來復(fù)染細(xì)胞的細(xì)胞核。 對于非固定的活細(xì)胞來說,hoechst33342 可以起到區(qū)別凋亡和正常細(xì)胞的作用,因?yàn)榈蛲黾?xì)胞的膜通透性增強(qiáng),因此進(jìn)入細(xì)胞中的Hoechst 33342 比正常細(xì)胞的多,熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高,此外,凋亡細(xì)胞的染色體DNA 對于細(xì)胞的稱染來說,可以配以適當(dāng)?shù)?.1% Triton X-100 通透,從而是所有細(xì)胞細(xì)胞核有效的染上hoechst 染料。 儲(chǔ)存:4℃,避光,有效期6個(gè)月。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Barium sulfate纖維母生長因子5抗體包裝1g
大黃-8-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Benzenesulfonic acid脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體包裝25g
大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Benzoin感覺神經(jīng)蛋白1抗體包裝5g
大黃英文名稱: Benzophenone hydrazone線粒體型共濟(jì)失調(diào)蛋白抗體包裝1g
大黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth (III) chlorideFC段IgE受體α多肽抗體包裝1g
大戟因子L1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth (III) citrateFAM81A蛋白抗體包裝250mg
大薊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth (III) potassium iodideFAM78B蛋白抗體包裝25g
大薊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth (III) sulfate9號(hào)染色體開放閱讀框59抗體包裝5g
大麥芽堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth(III) subcarbonate basicFAM76A蛋白抗體包裝100g
大青葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bismuth(III) subsalicylateFAM76B蛋白抗體包裝1g
大蒜,二烯基二硫英文名稱: Bismuth, granularFAM92A1蛋白抗體包裝1g
大血藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: BNOA-Na, β--Naphthoxyacetic acid sodium saltFAM98A蛋白抗體包裝5g
大葉骨碎樸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Brij 56FRMD5蛋白抗體包裝25g
大葉茜草英文名稱: Bromochlorophenol blue sodium saltFRMD6蛋白抗體包裝5g
大葉茜草英文名稱: Bromophenol blue, sodium saltFAM161A蛋白抗體包裝25g
暫無Planktotalea│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品神經(jīng)營養(yǎng)因子3試劑盒5-羥基-6,7-二氧基黃;5-Hy
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分析標(biāo)準(zhǔn)品神經(jīng)型一氧化氮合成試劑盒5-羥基-7,8-二氧基黃;5-hy
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品神經(jīng)粘著分子試劑盒去氫荷包牡丹堿;Dehydrodicen
Hoechst 33342染色液香蕉 1-丁基-3-甲基咪唑乳酸鹽β烯Elisa
鴨疫里氏桿 3-氟-4-甲酸甲酯抗甲狀腺抗體Elisa
嘴突凸臍蠕孢 三聚酸酯白介1可溶性受體Elisa
牛布氏陽性血清品(虎紅平板) (2S,6S)-2,6-二叔丁基-2,3,5,6-四氫-1H-咪唑并[1,2-a]咪唑百日咳IgG抗體Elisa
Rhizobium 4-甲磺酰基苯肼鹽酸鹽百日咳IgM抗體Elisa
塔氏糖多孢 2,6-二甲基喹啉T4多聚核苷酸激Elisa
銅綠假單胞 6-溴-2-甲基喹啉保羅樣激Elisa
大腸埃希 4-(4-溴吡唑-1-基)-1-甲酸叔丁酯尿泛-核糖體融合蛋白52Elisa
金黃殼囊孢 (S)-1-(2,6-二氯-3-氟苯基)乙淋球抗體Elisa
墳?zāi)构?jié)桿 2-羥基-3-甲氧基EB病衣殼抗原IgG抗體Elisa
枯草芽孢桿 5-羥基異喹啉EB病衣殼抗原IgM抗體Elisa
土曲霉 (2S,4R)-1-((S)-2-(環(huán)戊氧羰基))-3,3-二甲基丁酰基)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸EB病核抗原Elisa
燒土正青霉 2-(二氟甲氧基)苯甲基大腸桿宿主殘留蛋白Elisa
雞縱 4-正基T4多聚核苷酸激Elisa
蘋果錐梗孢 3--5-氮雜STEAP家族成員1Elisa