商品介紹:
MKC3946是一種有效的IRE1α抑制劑,常用于癌癥研究。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1093119-54-0 純度:99.77% 分子量:380.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
IRE1α抑制劑(MKC3946) | MKC3946 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
日本玉蕈球蛋白抗原Anti-AFF1 Antibody胞漿磷蛋白3(STMN3)
枯斑擬盤多毛孢蛋白激活受體-2桔抗肽Anti-AGAP2 Antibody胞漿磷蛋白2(STMN2)
側(cè)柄褐孔菌末梢同源匡基因多肽片段Anti-AGBL2 Antibody胞漿磷蛋白1(STMN1)
桃紅平菇海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AGBL4 Antibody胞漿抗蛋白水解3(CAP3)
枯草芽孢桿菌海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AGBL2 Antibody胞漿抗蛋白水解2(CAP2)
莫哈韋芽孢桿菌海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AGPAT3 Antibody胞漿多聚A結(jié)合蛋白1樣蛋白(PABPC1L)
釀酒酵母海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AGBL3 Antibody胞漿-5',3'-核苷(NT5C)
水叢毛單胞菌海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AGPAT5 Antibody胞苷脫(CDA)
茯苓海葵神經(jīng)(35肽)Anti-AIF1 Antibody伴肌動(dòng)蛋白(NEB)
白淺灰鏈霉菌重組乙肝病核心抗原Anti-AHSP Antibody伴刀豆球蛋白A(ConA)
殼菌重組乙肝病e抗原Anti-AIF1 Antibody半椎蛋白2(HMCN2)
乳乳球菌乳亞種重組人登革熱病2型診斷抗原Anti-AGR3 Antibody半椎蛋白1(HMCN1)
黑曲霉重組豬水腫蛋白Anti-AICDA Antibody半乳糖神經(jīng)酰(GALC)
產(chǎn)克雷伯氏菌腎上腺髓質(zhì)(22-52)Anti-AIFM2 Antibody半乳糖凝集9C(GAL9C)
尖鐮孢腎上腺髓質(zhì)(22-42)Anti-AIG1 Antibody半乳糖凝集9B(GAL9B)
彎孢菌α-1抗(抗原)Anti-AIRE Antibody半乳糖凝集9(GAL9)
細(xì)胞中心粒蛋白抗體吸水鏈霉菌奧薩霉亞種大鼠膀胱組織提取物
PSF2蛋白抗體涇陽鏈霉菌大鼠腎小球組織提取物
腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常同源蛋白抗體沙鏈霉菌大鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物
蛋白調(diào)解因子6抗體羅倫隱球酵母大鼠牙乳頭組織提取物
IRE1α抑制劑(MKC3946)提純牛型結(jié)核(國(guó)家參照品)* Jatrophane 5
腐皮鐮孢 2,5,9,14-四乙酰氧基-3-苯甲酰基氧基-8,15-二羥基
釀酒酵母 Jatrophane 2
喜橄欖假絲酵母 羅旦梅交酯
芍藥枝孢霉 Gelomuloside B
皺木耳 Gelomuloside A
平滑針層孔 Gelomulide N
竹蓀(棘托) Erysubin A
小孔異擔(dān)子 ent-Labda-8(17),13Z-diene- 15,16
相思根瘤 ent-3β-Cinnamoyloxykaur-16-en-19
普羅威登斯屬 Dodonolide
枯草芽孢桿 Demethylsonchifolin
腐皮鐮孢(茄腐鐮刀) 白曼陀羅
長(zhǎng)枝木霉 桂二萜
根瘤 Chloroenhydrin