以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 細(xì)胞周期分析、活細(xì)胞染色等 注意事項(xiàng): Hoechst33342是一種熒光染料,可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色,也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。 儲(chǔ)存條件:-20℃,避光,6個(gè)月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
南沙參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Triflumuron磷化GADD153抗體包裝250mg
南山楂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PencycuronG蛋白αS抗體(鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白Gα s)包裝1g
南五味子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Hexythiazox solutionG蛋白β4抗體/鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白β亞基4包裝250mg
鬧羊花II英文名稱: Hexythiazox solutionG蛋白β2抗體/鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白β亞基2包裝1g
鬧羊花III英文名稱: Imazalil solutionG蛋白γ2抗體/鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白γ2抗體包裝5g
鬧羊花V英文名稱: Siduron磷化糖原合激3β抗體包裝100g
鬧洋花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SimazineG蛋白偶聯(lián)受體GPR92蛋白抗體包裝25g
擬人參皂苷F11(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Simazine solution己糖6磷脫氫抗體包裝500g
擬人參皂苷Rh2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phoxim solutionG蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體包裝5g
擬人參皂苷RT5(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phoxim solution腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝100g
鳥苷英文名稱: Pirimicarb solution葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白10抗體包裝25g
尿囊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pyrazosulfuron腸高血糖相關(guān)肽抗體包裝500g
檸檬苦,黃柏內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,橙皮提取)英文名稱: PretilachlorG蛋白偶聯(lián)受體120抗體包裝1g
檸檬苦;吳茱萸內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品,吳茱萸提取)英文名稱: Pretilachlor solutionG蛋白偶聯(lián)受體40抗體包裝25g
牛白藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Propoxur solution20號(hào)染色體開放閱讀框100抗體包裝5g
克魯弗酵母克魯弗變種Saccharomyces│kluyveri var. kluyveri 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測(cè)定皮膚淋巴相關(guān)抗原試劑盒木犀草苷;Cynaroside
枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,JP16皮膚蛋白試劑盒迷迭香;Rosmarinic acid
: Yt17資源名稱: 假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP34,BR,可用于培養(yǎng)皮動(dòng)蛋白試劑盒牡荊;Vitexin
Hoechst33342染色液(含封片劑)類干酪乳桿 乳清酸甲酯角蛋白18-3A9Elisa
長(zhǎng)雙歧桿 6-溴-2-羥血小板生成抗體Elisa
普通層褶 (Z)-3-甲基戊-2-烯-4-炔-1-絲氨酸;蘇氨酸蛋白激1Elisa
香菇 2-甲硫基苯并噻唑水通道蛋白7Elisa
橄欖色毛殼 草酸鎂水通道蛋白11Elisa
抗性微桿 雙(1,5-環(huán)辛二烯)-三氟甲磺酸銠生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)蛋白43Elisa
粉褶環(huán)柄菇 4-甲氧基間苯二接觸蛋白4Elisa
枯草芽孢桿 2-糠酸乙酯CD166分子Elisa
巨獸芽孢桿 (S)-3-氨基丁脫氫1家族成員Elisa
假單胞屬 1,1-環(huán)已基二乙酸單酰(CAM)幽門螺旋桿IgA抗體Elisa
枯草芽孢桿 2'-溴乙酰苯CD29分子Elisa
Nocardia 反-查耳酮三結(jié)構(gòu)域包含蛋白72Elisa
枯草芽孢桿 鹽酸普魯可溶性糖蛋白ⅥElisa
多粘類芽孢桿 4-異氧基苯磺酰氯CD147分子Elisa
膠孢 2-氯喹唑啉碳酸酐6Elisa