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詳細介紹
商品介紹：
本試劑盒是用EGFP標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個樣品。可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。 試劑盒組份： Annexin V-EGFP—————————100μl Annexin V-EGFP結合液——————12ml 碘化丙啶染色液—————————220μl Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內鈣離子依賴的磷酯結合蛋白，參與細胞內的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。 Annexin V選擇性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。 用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。 本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經喪失，Annexin V-EGFP可以進入到細胞漿內，與位于細胞膜內側的磷酯酰絲氨酸結合，從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。 綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細胞和凋亡晚期的細胞可以同時被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。 儲存條件：4℃避光，有效期6個月。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
| Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit | 20次|50次 | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
血管緊張轉化2(ACE2)英文名稱：ACE2 ELISA Kit芳香烴受體抗體包裝5g
血管緊張轉化(ACE)英文名稱：ACE ELISA Kit吸引抗體包裝1g
血管緊張原(aGT)英文名稱：aGT ELISA Kit腺苷三磷結合盒轉運體A1抗體包裝5g
血管緊張Ⅱ受體2(AT2R)英文名稱：AT2R ELISA Kit蛋白激B2包裝1g
血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)英文名稱：ANG-Ⅱ ELISA Kit血管生成2抗體包裝25g
血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)英文名稱：Ang-Ⅰ ELISA Kit芳香化/色P450/雌激合成抗體包裝5g
血管緊張1-7(Ang1-7)英文名稱：Ang1-7 ELISA Kit腺苷A2A受體抗體包裝1g
血管活性腸肽(VIP)英文名稱：VIP ELISA Kit蛋白激A錨定蛋白95抗體包裝25g
溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)英文名稱：BrdU ELISA Kit頂膜鈉依賴性膽鹽轉運體蛋白抗體包裝5g
雄烯二(ASD)英文名稱：ASD ELISA Kit去整合樣金屬蛋白8抗體包裝10MG
雄激受體(AR)英文名稱：AR ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基樣蛋白3抗體包裝50MG
性激結合球蛋白(SHBG)英文名稱：SHBG ELISA KitACN9蛋白抗體包裝250mg
信號轉導分子7(Smad7)英文名稱：Smad7 ELISA Kit雙鏈RNA腺苷脫基抗體（N端）包裝50MG
信號轉導分子1(Smad1)英文名稱：Smad1 ELISA Kit腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g
新生狀腺(NN-T4)英文名稱：NN-T4 ELISA Kit腺苷激抗體包裝25mg
肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體白介4(IL4)Pritelivir (BAY 57-1293) is a potent helicase primase inhibitor, exhibiting anti
Annexin V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒佩特曲霉 環磺酰氯MEK激酶檢測試劑盒
膠孢 2-乙基吡MEST檢測試劑盒
美麗短芽孢桿 1-萘酸microRNA-210檢測試劑盒
奇異球 反式-鄰溴肉桂Spondin-2；mindin檢測試劑盒
根瘤 1-溴-3,4,5-三氟苯MRP-14檢測試劑盒
紅曲紅曲 4-溴-3-甲基吡唑腎上腺髓質前體中段肽檢測試劑盒
短桿狀馬賽 4-甲酸叔丁酯MxA蛋白檢測試劑盒
傘枝犁頭霉 2,5-二溴對苯二甲酸NADH-色素b5還原酶檢測試劑盒
摩洛哥芽孢桿 4-氯-6-乙基-5-氟嘧啶Na-K-ATP酶檢測試劑盒
囊孔附毛 L-(+)-扁桃酸乙酯nectin-4檢測試劑盒
膠孢 環己基雙苯膦氧化物NOD樣受體1檢測試劑盒
黑曲霉 N,N'-(4,4'-亞甲基二苯基)雙馬來酰亞NOD樣受體-2檢測試劑盒
*蟲擬蠟 鄰甲基三氟甲苯跨膜受體蛋白Notch-1檢測試劑盒
瓦克青霉 二丁基二硫代氨酸鋅N端前腦鈉素檢測試劑盒
印度不動桿 2,4,5-基噻唑N端中段骨鈣素檢測試劑盒
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