產(chǎn)品屬性:
中文名稱:RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)
英文名稱:Ro 5126766
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Ro5126766(CH5126766)是一種強(qiáng)效的選擇性雙重RAF/MEK抑制劑,抑制SK-MEL-28,SK-MEL-2,MIAPACA-2,和SW480細(xì)胞系中,IC50值分別為為65,28,40,和46nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:946128-88-7 別名:CH5126766 純度:98.0% 分子量:471.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
黃銹傘Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADCK2 Antibody脫氫β(PDHβ)
赭色擲孢酵母Cy5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克抗體Anti-ADCK5 Antibody脫氫α(PDHα)
竹針孢座囊菌Anti-ADCY3 Antibody羧化(PC)
釀酒酵母Anti-ADCY4 Antibody糖磷異構(gòu)1(TPI1)
耐冷冷桿菌Anti-ADCY5 Antibody肽(AAP)
棲稻黃色單胞菌Anti-ADCY6 Antibody/絲/半胱/蘇轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ASCT1)
釀酒酵母Anti-ADCY9 Antibody別孕烯(AP)
無環(huán)田頭菇Anti-ADD2 Antibody表皮轉(zhuǎn)谷酰(TGM3)
煙色擬盤多毛孢Anti-ADD3 Antibody表皮調(diào)節(jié)(EREG)
球孢白僵菌Anti-ADGRA1 Antibody表皮生長因子途徑底物蛋白3(EPN3)
八孢裂殖酵母Anti-ADD1 Antibody表皮生長因子途徑底物蛋白2(EPN2)
弗雷德里克斯堡假單胞菌牛血清白蛋白(第五組分)Anti-ADCY8 Antibody表皮生長因子途徑底物蛋白1(EPN1)
華根霉FITC標(biāo)記蛋白-GAnti-ADGRA2 Antibody表皮生長因子受體2(EGFR2)
多黏類芽孢桿菌膽固Anti-ADGRB2 Antibody表皮膜蛋白3(EMP3)
弗蘭克氏菌β淀粉樣肽1-16(多肽蛋白)Anti-ADGRB1 Antibody表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)
Corynebacterium variabileβ淀粉樣肽31-35(多肽蛋白)Anti-ADGRD2 Antibody表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)
過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活子1β抗體粟褐芽孢桿菌大鼠胰腺組織提取物
p53調(diào)節(jié)凋亡誘導(dǎo)蛋白1抗體沙門氏菌IV大鼠乳腺組織提取物
泛甲基賴抗體熏衣草灰鏈霉菌大鼠淋巴組織提取物
磷脂爬行3抗體淺灰鏈霉菌杭州變種大鼠卵巢組織提取物
RAF/MEK雙重抑制劑(Ro 5126766)皺折曲霉 Obtucarbamate B
谷氨酸棒桿 Neochamaejasmin B
黑木耳 Neochamaejasmin B
產(chǎn)氨棒桿 5,7,4'-Trihydroxy-3,6-dimethoxy
釀酒酵母 4-Hydroxy-11,12,13-trinor-5-eude
淺白隱球酵母 3α-Angeloyloxypterokaurene L3
微孢毛霉 3-Epiakebonoic acid
米根霉 28-Deoxonimbolide
弗雷德里克斯堡假單胞 15-Dihydroepioxylubimin
微白黃鏈霉 10-O-Methylprotosappanin B
乳酒假絲酵母 1,7-二(4-羥基苯基)-6-庚烯-3-酮
深紅紅螺* (Z)-阿枯米定堿
平臍蠕孢 Vandrikidine
Rufibacter Sulfocostunolide A
沖擊地土地桿 繡線菊堿A
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)