商品介紹:
英文名稱:Tyrphostin B42 產(chǎn)品規(guī)格:5mg AG-490 (Tyrphostin B42)是一種EGFR 抑制劑,IC50為0.1 μM,作用于EGFR 比作用于ErbB2選擇性高135倍,對JAK2也有抑制作用,對Lck,Lyn,Btk,Syk 和Src 沒有抑制活性。 分子量:294.30 化學(xué)式:C17H14N2O3 CAS:133550-30-8 儲存:-20℃,有效期24個月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
嗜芽孢桿菌趨化樣因子超家族成員2抗體Human DDX3(DEAD box protein 3, X-chromosomal) ELISA Kit兔阿霉(ADR)免疫試劑盒
白色茶樹菇胱硫γ裂解抗體Human ECM2 ELISA Kit兔γ-谷酰轉(zhuǎn)移1(GGT1)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗體Human DTX3L(E3 ubiquitin-protein ligase DTX3L) ELISA Kit兔β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒
猴頭菌—50043酪蛋白激2相互作用蛋白1抗體Human E2F4 ELISA Kit兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)免疫試劑盒
米羅布里格小單孢菌CD40L抗體Human E2F7 ELISA Kit兔S100-A5蛋白(S100A5)免疫試劑盒
米曲霉α-s1酪蛋白抗體Human EDAR ELISA Kit兔P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌CIDEB抗體Human EDC3 ELISA Kit兔p物質(zhì)(SP)免疫試劑盒
大腸埃希菌高密度脂蛋白受體/清道夫受體抗體Human EDC4 ELISA Kit兔p53(p53)免疫試劑盒
西西布哈加瓦氏菌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體Human CXCL17 ELISA Kit兔N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒
谷棒狀桿菌ATCC13032凋亡抑制因子抗體Human DEFB121 ELISA Kit兔NADPH氧化1(NOX1)免疫試劑盒
米根霉D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體Human DNAJB11 ELISA Kit兔C肽(C-Peptide)免疫試劑盒
慢生根瘤菌降鈣抗體Human CTRP6 ELISA Kit兔CD8分子(CD8)免疫試劑盒
變異短波單胞菌20號染色體開放閱讀框14抗體Human DNAJB4 ELISA Kit兔CD4分子(CD4)免疫試劑盒
多粘芽孢桿菌結(jié)締組織生長因子抗體Human Cyclin T1 ELISA Kit兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌性T抗原-4抗體Human DNAJB(DnaJ homolog subfamily B member 8) ELISA Kit兔ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1型13(ADAMTS13)免疫試劑盒
黑曲霉降鈣受體抗體Human CYGB(Cytoglobin) ELISA Kit兔8-異構(gòu)前列腺(8-epi-PGF2α)免疫試劑盒
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>96.5%,BRRho GDP解離抑制因子1試劑盒輪環(huán)藤寧
Clostridium cellulosiClostridium cellulosi 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRREST協(xié)阻抑因子3試劑盒龍膽山酚
堅強芽胞桿菌Bacillus│firmus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRras同源物基因家族成員b試劑盒雷公藤內(nèi)酯
AG 490 (JAK抑制劑)反卷毛殼 4-(2-)嗎啉金屬硫蛋白Elisa
云芝栓孔 乙基苯基硫緊密連接蛋白Elisa
黑木耳云章氏酵母 3-(溴甲基)喹喔啉-2(1H)-酮緊密連接蛋白1Elisa
芽胞桿屬 N-α-芐氧羰基-L-2,4-二氨基丁酸精氨酸代琥珀酸合成Elisa
鞘氨桿 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)精氨酸加壓Elisa
瘤突曲霉 Z-L-脯氨精氨酸Elisa
卷枝毛霉 N-亞硝基二正精氨酸1Elisa
糞腸球 (-)-二特戊酰-L-巨噬集落激因子Elisa
褐囊蜜環(huán) (-)-1,4-二-O-芐基-L-蘇糖巨噬炎性蛋白-1αElisa
蘇云金芽孢桿景洪亞種 (+)-1,4-二-O-芐基-D-蘇糖巨噬炎性蛋白2Elisa
蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草) (1R,2S)-2-(二丁氨基)-1-苯基-1-巨噬炎性蛋白2αElisa
亞褐鈸孔 L-(+)-二乙酯巨噬炎性蛋白3αElisa
三線鐮孢 (S)-(+)-環(huán)氧烷巨噬移動抑制因子Elisa
阿姆斯特丹曲霉 (S)-(-)-1-(4-)乙聚蛋白多糖Elisa
RP4質(zhì)粒 (+)二異松蒎基烷抗肺泡基底膜抗體Elisa