詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
WNK463 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
WNK463是一個生物的泛WNK-kinase抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:2012607-27-9 純度:99.72% 分子量:463.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
草色串孢溶菌抗體Human IFITM3(Interferon-induced transmembrane protein 3) ELISA Kit胃抑(GIP)
多座蟲草*LAD1蛋白抗體Human PIAS1 ELISA Kit胃內因子(GIF)
黑木耳胸腺生成LAP2抗體Human PIAS2 ELISA Kit胃泌抗體(GCA)
黑曲霉富含亮重復蛋白6抗體Human PIAS3 ELISA Kit胃泌釋放肽前體(ProGRP)
地下節桿菌低密度脂蛋白受體相關蛋白12抗體(抑制腫瘤蛋白7)Human PIAS4 ELISA Kit胃泌釋放多肽(GRP)
解淀粉芽孢桿菌磷化相似腫瘤抑制基因HUGL抗體Human PHLDA1 ELISA Kit胃泌(Gastrin)
枯草芽孢桿菌低密度脂蛋白受體抗體Human PHLPP ELISA Kit胃泌(GAS)
瘦抗體Human PHLDA2 ELISA Kit胃動(MTL)
小鏈霉菌腫瘤自身抗原LMO4抗體Human PHLPPL ELISA Kit胃動蛋白2(GKN2)
繩生毛殼淋巴特異性蛋白酪激抗體Human LRP8(Low-density lipoprotein receptor-related protein 8) ELISA Kit胃蛋白原C(PG-C)
釀酒酵母白免疫球蛋白樣受體8抗體Human PGRMC2 ELISA Kit胃蛋白原A(PG-A)
黑木耳(186)白三烯B4受體1抗體Human PHKA2 ELISA Kit胃蛋白(PP)
巨大芽孢桿菌白免疫球蛋白樣受體6抗體Human PHACTR4 ELISA Kit胃蛋白(PG)
Candida淋巴活化基因-3抗體Human PHACTR1 ELISA Kit胃蛋白(GT)
變平滑假絲酵母白相關免疫球蛋白樣受體1抗體Human PHAX ELISA Kit未甲基化寡聚脫氧核苷(CpG-ODN)
柴油食烷菌白分化抗原CD207抗體Human MUSK(Muscle, skeletal receptor tyrosine-protein kinase) ELISA Kit尾肢同源蛋白2(PYGO2/PP7910)
金黃色葡萄球菌Staphylococcus│aureus 質量規格:>95.0%(GC)(T)土貝母苷
嘴突凸臍蠕孢Exserohilum│rostratum 質量規格:>97.0%(GC)(T)柴胡皂苷B2
葉氏假交替單胞菌Pseudoalteromonas│elyakovii 質量規格:>98.0%(GC)(T)柴胡皂苷B1
泛WNK-kinase抑制劑(WNK463)香菇 4-氨基-3-氟苯甲三磷酸核苷磷酸二酯1Elisa
大腸埃希 2--4-苯IgG抗體Elisa
釀酒酵母 1,1,1,2-四乙烷標準溶液IgA抗體Elisa
黃傘 基乙IgM抗體Elisa
中孢短芽孢桿 2-甲基-3-甲硫基呋喃輪狀病IgM抗體Elisa
普雷恩毛霉 二十五烷輪狀病IgA抗體Elisa
芹側耳(杏鮑菇) 十六烯輪狀病IgG抗體Elisa
哈氏弧 4--3-三氟酚超氧化物歧化Elisa
凍土毛霉 十五烷舌抗肽Elisa
谷氨酸棒桿 十五烷焦蟲病抗體Elisa
茄病鐮刀 (甲酰甲基)三苯基化磷β2微球蛋白Elisa
粘質沙雷氏 1,8-辛二總蛋白Elisa
美澳型核果褐腐病 基二硫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷Elisa
總狀共頭霉 3-甲氨基蘋果酸脫氫Elisa
擬莖點霉 1,6-二溴己烷肉堿脂酰轉移Elisa