以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
DUB抑制劑(PR-619) | PR-619 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PR-619是一種DUB抑制劑,作用于USP4,USP8,USP7,USP2和USP5,EC50分別為3.93,4.9,6.86,7.2和8.61μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:2645-32-1 別名:2,6-Diamino-3,5-dithiocyanopyridine 純度:98.07% 分子量:223.28 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌膠體金標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-Wnt8a Antibody代謝型型谷受體3(GRM3)
金黃色葡萄球菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XAF1 Antibody大型中性基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(LAT1)
伯頓生絲畢赤酵母Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XAF1 Antibody大型多功能肽7(LMP7)
平菇PE標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XAF1 Antibody受體1(CNR1)
香菇PE-Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WRN Antibody存活(Surv)
枯草芽孢桿菌PE-CY5標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XAF1 Antibody脆性X智力遲鈍蛋白1(FMR1)
毛栓孔菌辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-WWOX Antibody催乳受體(PRLR)
芽胞桿菌生物標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XBP1 Antibody(PB0487)簇集蛋白(CLU)
擴(kuò)展青霉Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XCL1 Antibody促胰液受體(SCTR)
大邱螯合球菌Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgMAnti-XCL1 Antibody促胰液(SCT)
慢生根瘤菌PE-Cy3標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XCL1 Antibody促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)
肉桂色乳菇APC標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XDH Antibody促腎上腺皮質(zhì)釋放激結(jié)合蛋白(CRHBP)
麥根腐平臍蠕孢Cy3標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XPA Antibody促腎上腺皮質(zhì)激樣中葉肽(CLIP)
矩圓黑盤孢Cy5標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XDH Antibody促泌(SCGN)
扁平鏈霉菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XIAP Antibody促凋亡蛋白1(APOPT1)
大腸埃希菌Cy7標(biāo)記的兔抗豬IgGAnti-XIAP Antibody叢狀蛋白D1(PLXND1)
蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)抗體水螺菌小鼠皮下脂肪組織提取物
脯酰羥化抗體腸炎沙門氏菌腸炎亞種小鼠胎兒真皮組織提取物
棕櫚酰蛋白硫酯1抗體萎蔫短小桿菌小鼠視網(wǎng)膜組織提取物
富含脯蛋白11抗體海藻希瓦氏菌小鼠晶狀體組織提取物
DUB抑制劑(PR-619)合適檸檬酸桿 5-腺苷一磷酸二鈉鹽
淡紫擬青霉 多索茶堿
雜色曲霉 (1R)-(-)-桃金娘烯
四脊裸胞殼 蛔蒿
根瘤 優(yōu)葛縷酮
假單胞屬 法莫替丁
釀酒酵母 纈草
斑污擬盤多孔孢 Linderaspirone A
蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 Guajadial B
熱帶假絲酵母 Millewanin H
墨西哥諾卡氏 Millewanin G
淺紫灰鏈霉蠶膿亞種 番石榴二
無 Gelsempervine A
長柄鏈格孢 長春堿衍生物
棒狀乳桿棒狀亞種 4,5-Diepipsidial A