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詳細介紹
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
| Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit | 20次|50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品，經過生物素標記和后續的DAB顯色等步驟，即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。本試劑盒足夠檢測20個樣品。 試劑盒組分： TdT酶———————————40μl Biotin-dUTP————————960μl TdT酶稀釋液(選用)—————500μl Streptavidin-HRP——————22μl Streptavidin-HRP稀釋液———1ml DAB顯色液A————————6ml DAB顯色液B————————6ml 標記反應終止液——————6ml 細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結合，后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞，從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。 本試劑盒有如下優點： (1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色強，可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。 (2)特異性好：TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。 (3)快速：僅需約2-3個小時即可完成。 (4)應用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可以檢測培養的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。 TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區分開，另一方面也不會把射線等誘導發生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。 極少數細胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發現TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下，好同時檢測多個凋亡指標。 儲存條件：-20℃。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
微管相關蛋白1A/1B輕鏈3B(MAP1LC3B)英文名稱：MAP1LC3B ELISA Kit磷化β抑制蛋白1抗體包裝1g
微管蛋白β3(TUBB3)英文名稱：TUBB3 ELISA Kit磷化有絲分裂激A抗體包裝25g
網膜(omentin)英文名稱：omentin ELISA Kit磷化APS抗體包裝5g
晚期糖基化終末產物(AGEs)英文名稱：AGEs ELISA Kit有絲分裂激A抗體包裝1g
脫氧膠原吡啶交聯(DPD)英文名稱：DPD ELISA Kit干擾誘導蛋白AIM2抗體包裝25g
脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)英文名稱：DPD ELISA Kit通道蛋白-2抗體包裝5g
脫氫表雄硫酯(DHEA-S)英文名稱：DHEA-S ELISA Kit腫瘤抑制基因ABI2/精酪蛋白激結合蛋白抗體包裝25ml
脫氫表雄S7(DHEA-S7)英文名稱：DHEA-S7 ELISA KitADP核糖基化因子樣11抗體包裝5ml
脫氫表雄(DHEA)英文名稱：DHEA ELISA KitARM重復X連鎖蛋白ARMCX3抗體包裝1g
褪黑(MT)英文名稱：MT ELISA KitARM重復X連鎖蛋白ARMCX1抗體包裝5g
突觸融合蛋白2(STX2)英文名稱：STX2 ELISA KitARM重復X連鎖蛋白ARMCX2抗體包裝25g
突觸融合蛋白1A(STX1A)英文名稱：STX1A ELISA Kit自噬相關蛋白10抗體包裝25g
透明質結合蛋白(HABP)英文名稱：HABP ELISA Kit?；Y合結構域蛋白6抗體包裝5g
透明質(HA)英文名稱：HA ELISA Kit基酰化1抗體包裝25g
銅藍蛋白(CP/CER)英文名稱：CP/CER ELISA Kit脂肪甘油三酯脂抗體包裝5g
脂聯受體2抗體激肽釋放3(KLK3)Torin 2 是一種 mTOR 抑制劑，抑制內 mTOR 活性，EC50 為 0.25 nM，比作用于 PI3K (EC50: 200 nM) 選擇性高
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)釀酒酵母 N-Boc-3-甲基哌Twist相關蛋白1檢測試劑盒
黃青霉 2-甲基乙酰苯Twist轉錄因子檢測試劑盒
齒孢青霉 3-甲基二苯T亞群檢測試劑盒
枯草芽孢桿 3-乙基氨基-4-酚T亞群檢測試劑盒
釀酒酵母 4-氯-2-芐基T球蛋白粘蛋白分子3檢測試劑盒
玫瑰小雙孢玫瑰亞種 2,5-二甲氧基苯乙酮UL16結合蛋白-1檢測試劑盒
彩色豆馬勃 鄰基UL16結合蛋白-2檢測試劑盒
新疆薄層 4-氯二苯甲UL16結合蛋白-3檢測試劑盒
異常海桿狀 2,4-二氯溴苯Vasorin;SLIT-like 2檢測試劑盒
異常畢赤酵母 (S)-1-苯基-1,2,3,4-四氫異喹啉WNT1可誘導信號轉導途徑蛋白1檢測試劑盒
海膽橙色小單孢 N,N-二甲酰二乙基縮X盒結合蛋白1檢測試劑盒
運動節桿 4-酸三苯X-連鎖凋亡抑制蛋白檢測試劑盒
CCTCC AB 2012479 3-三氟甲基吡唑Yes關聯蛋白檢測試劑盒
熱帶假絲酵母 2,6-二氯芐氯ZBED3檢測試劑盒
牛邊緣無漿體（鎮原株） 2,5-二羥基苯磺酸鈣一水合物ZNF3基因檢測試劑盒
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