以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
GSK-7975A是高效有的CRAC通道抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1253186-56-9 純度:98.0% 分子量:397.3 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
棘孢小單孢菌外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體Human CTDSPL (CTD small phosphatase-like protein) ELISA KIT牛繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒
楊生盤二孢富馬水合抗體Human CTPS1 (CTP synthase 1) ELISA KIT牛免疫球蛋白G-2(IgG-2)免疫試劑盒
地衣芽孢桿菌成纖維生長(zhǎng)因子21抗體Human SLC14A1(Urea transporter 1) ELISA Kit牛免疫球蛋白G-1(IgG-1)免疫試劑盒
類高加索奶乳桿菌核仁纖維蛋白抗體Human CRIM1 (Cysteine-rich motor neuron 1 protein) ELISA KIT牛免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
糙皮側(cè)耳鐵蛋白輕鏈抗體Human CLEC12A (C-type lectin domain family 12 member A) ELISA KIT牛免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒
慢生海桿狀菌*肝核因子3抗體Human CYHR1 (Cysteine and histidine-rich protein 1) ELISA KIT牛免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
卷枝毛霉詹森變型果糖1,6-二磷酯抗體Human CUBN(Cubilin) ELISA Kit牛卵泡抑(FST)免疫試劑盒
黃赭色鏈霉菌6磷果糖激抗體Human CRIP1 (Cysteine-rich protein 1) ELISA KIT牛磷烯式羧激(PCK)免疫試劑盒
阪崎腸桿菌肌肉果糖二磷抗體Human CUEDC1 (CUE domain-containing protein 1) ELISA KIT牛磷化腺苷活化蛋白激(pAMPK)免疫試劑盒
羅爾斯通氏菌纖維蛋白原γ鏈抗體Human CRISPLD1 (Cysteine-rich secretory protein LCCL domain-containing 1) ELISA KIT牛磷果糖激(PFK)免疫試劑盒
釀酒酵母纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B)Human CPXCR1 (CPX chromosomal region candidate gene 1 protein) ELISA KIT牛磷甘油酯激2(PGK2)免疫試劑盒
巴斯德畢赤酵母原癌基因c FGR抗體Human CDRT4 (CMT1A duplicated region transcript 4 protein homolog) ELISA KIT??谔阋?FMDV)抗體(IgM)免疫試劑盒
糞產(chǎn)堿菌肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體Human CFDP1 (Craniofacial development protein 1) ELISA KIT??扇苄訡D86(B7-2/sCD86)免疫試劑盒
漢遜德巴利酵母磷化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體Human CRAMP1 (Protein cramped-like) ELISA KIT牛可溶性CD8(sCD8)免疫試劑盒
釀酒酵母纖連蛋白2抗體Human CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) ELISA KIT牛免疫試劑盒
無(wú)色桿菌纖連蛋白7抗體Human FOXC2(Forkhead box protein C2) ELISA Kit牛金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒
致病疫霉Phytophthora│infestans (Mont.) de Bary 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)維生E
厚皮單頂孢Monacrosporium│eudermatum 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)維生D3
食五環(huán)芳烴新鞘菌Novosphingobium│pentaromativorans 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99%(GC)維生D2
CRAC通道抑制劑(GSK-7975A)普拉格雷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Monukast sodiumDENND1B蛋白抗體包裝25ml
普拉克索堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Monukast sodiumDEPTOR蛋白抗體包裝5ml
普拉洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: β - Glucanase耳聾常染色體顯性遺傳相關(guān)蛋白1抗體包裝100g
普盧利沙星;普利沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: bivudine短鏈脫氫/還原家族9抗體包裝25g
普侖司特(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: bivudine短鏈脫氫還原13抗體包裝1g
普羅布考(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cyclen/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane視網(wǎng)膜短鏈脫氫/還原家族7抗體包裝25g
普瑞巴林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Raltitrexed短鏈脫氫/還原家族X抗體包裝5g
七烷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Ornithine L-aspartate salt短鏈脫氫/還原家族4抗體包裝100ml
齊多夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dipyridamole干擾腎癌蛋白2抗體包裝25ml
齊留通(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: TamibaroteneDGCR2蛋白抗體包裝500ml
茜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vindoline短鏈脫氫/還原家族7C抗體包裝100ml
強(qiáng)力霉堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rhodamine B松果體N基乙酰羥色抗體包裝500ml
羥酯(對(duì)羥基酯)標(biāo)準(zhǔn)品英文名稱: Cefoperazone Acid短鏈脫氫還原1抗體包裝100ml
羥磺鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cefoperazone AcidDNAJC7蛋白抗體包裝1g
羥酯鈉(對(duì)羥基酯鈉)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rhodamine 6G動(dòng)力結(jié)合蛋白DNMBP抗體包裝100g