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上海谷研實業有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-21 14:57:02瀏覽次數：231
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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X9795 | 應用領域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產品僅供科研 | 英文名稱 | BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Ki |
商品介紹：
BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS 鑒定等的試劑盒。 BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP 會被水解產生強反應性的產物，該產物會和NBT 發生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。 本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酸酯酶顯色。 組份規格： 試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml 試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl 試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl 使用說明 1. 對于組織切片或細胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對于檢測內源性堿性磷酸酯酶的組織或細胞樣品，在適當固定后，也用適當洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。 2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL 3. 后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。 4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長時間(可長達24 小時)，直至顯色至預期深淺。 5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應。 6. 對于組織切片或細胞樣品，顯色反應終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應終止后，可以室溫晾干避光保存。 儲存：4℃，有效期一年。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit | 共100ml | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
制霉菌（標準品）英文名稱： Sodium chloride鐵螯合抗體包裝1g
制霉（標準品）英文名稱： Guanidine hydrochlorideDH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體包裝1g
重長春瑞賓(標準品)英文名稱： Adonitol磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體包裝5g
重腎上腺（標準品）英文名稱： Yeast extract上皮粘附分子抗體包裝1g
周效磺(標準品)英文名稱： RNase A Solution酪蛋白激受體B2抗體包裝5g
注射用益氣復脈隨行對照品(暫行)英文名稱： D-Glucose, monohydrate表皮生長因子抗體包裝1g
壯觀霉(標準品)英文名稱： SDS表皮生長因子受體3抗體包裝5g
子囊霉（標準品）英文名稱： PEG 6000酪蛋白激A4受體抗體包裝1g
組(標準品）英文名稱： Tween 20上皮鈣粘附分子抗體包裝5g
左卡尼汀（標準品）英文名稱： Triton X-100紅生成受體抗體包裝1g
左羥哌（標準品）英文名稱： Tryptone腦啡肽抗體包裝5g
左旋地平/磺左旋地平（標準品）英文名稱： D-BiotinEID2蛋白抗體包裝25ml
左旋奧沙利鉑（奧沙利鉑雜質D）（標準品）英文名稱： Glycerol上皮粘附分子抗體包裝500ml
左旋(標準品)英文名稱： Sodium citrate, trisodium salt, dehydrate紅膜相關蛋白ERMAP抗體包裝100g
左氧沙星（標準品）英文名稱： Gelatin腺樣癌特異性相關抗原EMC1抗體包裝500g
竹瘤座菌Balansia│take (Miyake) Hara 質量規格：含量98.0-102%,I型糖蛋白130試劑盒三七總皂苷;Panax notogins
纖細白僵菌Beauveria│brongniartii (Sacc.) Petch 質量規格：>98%,USP32羰基還原[NADPH] 1試劑盒SN-38;7-Ethyl-10-Hyd
禽分枝桿菌Mycobacterium│avium 質量規格：HPLC>98%,標準品碳酐9試劑盒楊苷;Salicoside
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒枯草芽孢桿 3-三氟甲基肉桂Kruppel樣因子7Elisa
米曲霉 烯基氯化鎂(的四溶液,約1mol/L)甲胎蛋白異質體2Elisa
巨型艾美耳球蟲 吩惡噻空腹血糖Elisa
耐輻射奇球 3,4-亞甲二氧芐基空腹胰島Elisa
云南紅球屬 氧鈦酞菁核基質蛋白22Elisa
枯草芽孢桿 10H-吡啶并(3,2-b)(1,4)苯并噻酮還原1-B10Elisa
食油假單胞 3,4,5-三氟苯基氨酸14,15-環氧化二十碳Elisa
葉點霉 2-甲基-3-(三氟甲基)芐基溴狀瘤病16型IgG抗體Elisa
青霉 3-氟-4-乙酸狀瘤病18抗體IgGElisa
蘇云金芽孢桿 3-氟-4-乙同型半胱氨酸硫內酯Elisa
中慢生根瘤 3-氟-4-肝脂肪酸結合蛋白Elisa
大橋村鹽單胞 5'-氯-5'-脫氧腺苷水合物表面膜球蛋白DElisa
大腸埃希氏桿 (4-氟-3-基)甲激動異構;分裂MBElisa
香菇11 4-氟-3-甲酰黑色IgG抗體Elisa
加利福尼亞擬威爾酵母 5-氨基-2,4-二氟三氟甲苯黑色IgM抗體Elisa
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