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腫瘤細胞爬片實驗經驗總結
閱讀:219 發布時間:2017-9-27實驗室里沒有人做腫瘤細胞爬片,我連見都沒見過,老板的實驗卻要求這個東西,只能自己摸索。查資料 搜信息,自己實踐,終于做出了可以用來后期實驗的細胞爬片。
總結經驗如下:
首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時烤干備用。
爬片可以在培養皿 六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養皿中爬。一為節約經費(培養皿可以重復利用)二來覺得培養皿口大,操作比較方便。培養皿消毒同上,消毒時記得消兩把鑷子。
具體操作是:用胰酶消化好細胞,充分吹打,使之成單細胞懸液(注意:這一點很重要,關系到將來爬出來片子的質量)。
取出消毒的培養皿,可以先加少量培養基(以使玻片與培養皿緊密接觸),將玻片小心放入擺放其中,然后將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。zui后蓋上培養皿置于37度5%CO2的暖箱中培養,細胞生長狀況,24小時或更長時間適時取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次,每次3到5秒鐘,然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘,然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈,注意手法輕柔,要不然掉片很厲害。腫瘤細胞同時操作過程中注意玻片的正反面,要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置于濾紙上晾干,然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠*干了之后才能做后續實驗,要不然玻片會掉下來的,就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存備用,具體能保存多長時間不太清楚,當然盡量早用。
戊五醇;五羥基戊烷;1,2,3,4,5-五羥基戊烷 含量: 進口/國產 木糖醇 20mg/支 英文名稱 Xylitol 規格:
含量: 進口/國產 鹽酸育亨賓 20mg/支 英文名稱 Yohimbine Hydrochloride 規格:
尼古丁 含量: 進口/國產 煙堿 20mg/支 英文名稱 L-Nicotine 規格:
野靛堿 含量: 進口/國產 金雀花堿 20mg/支 英文名稱 Cytisine 規格:
秋水仙素 含量: 進口/國產 秋水仙堿 20mg/支 英文名稱 Colchicine 規格:
薯蕷皂素;地奧配質 含量: 進口/國產 薯蕷皂苷元 20mg/支 英文名稱 Diosgenin 規格:
薯蕷皂甙; 重樓皂苷III; 重樓皂甙III 含量: 進口/國產 薯蕷皂苷 20mg/支 英文名稱 Dioscin 規格:
原薯蕷皂甙 含量: 進口/國產 原薯蕷皂苷 20mg/支 英文名稱 Protodioscin 規格:
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