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轉(zhuǎn)化細胞篩選標志的確定
閱讀:474 發(fā)布時間:2018-1-2這轉(zhuǎn)化細胞分離試劑盒如何取舍,主要取決于目標細胞的表面是否具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲,避免所獲得的細胞被非目標細胞污染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志,那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標志,那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標志的確定
通過PubMed等數(shù)據(jù)庫中的文獻,我們一般可以確定在目標細胞上表達的篩選標志。如果文獻中找不到適合自己的表面標志,我們還可以用目標細胞的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會顯示,目標細胞上可能表達的表面標志,在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說,對一個T細胞進行BLAST搜索,結(jié)果會顯示該細胞是否表達CD4或CD8。在得知目標細胞表達CD4之后,我們可以先對樣品進行一個免疫實驗(如ELISA),以檢驗BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實目標細胞的確表達CD4,我們就可以用相應(yīng)試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。
一般流程
對于一個旨在分離CD4陽性T細胞的試劑盒來說,操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+ T細胞結(jié)合。然后洗去不需要的非目標細胞(即不表達CD4的細胞),留下磁珠-抗體-細胞復合物。轉(zhuǎn)化細胞將上述復合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育,二抗就會替代CD4+T細胞,形成磁珠-抗體-二抗復合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后,只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進行下游研究了。
50mg 特非那定相關(guān)物質(zhì)B標準品 Terfenadine Related Compound B
10161-33-8 50mg 孕三烯酮標準品 Trenbolone CIII
521-78-8 50mg 馬來酸曲米帕明標準品 Trimipramine Maleate
3083-77-0 50mg 阿糖尿苷標準品 Uracil Arabinoside
50700-72-6 50mg 維庫溴銨標準品 Vecuronium Bromide
190850-50-1 50mg 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)D標準品 Verapamil Related Compound D
120-14-9 50mg 維拉帕米相關(guān)物質(zhì)E標準品 Verapamil Related Compound E
50mg 維替泊芬相關(guān)物質(zhì)A標準品 Verteporfin Related Compound A
7481-88-1 50mg 扎西他濱相關(guān)物質(zhì)A標準品 Zalcitabine Related Compound A
轉(zhuǎn)化細胞