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轉化細胞消化培養法的步驟
閱讀:61 發布時間:2017-12-291.準備:轉化細胞取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。
4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。
5.消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6.分離:在消化過程中見消化液發混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養液。
7.計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養液調整后,分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。
8.培養:轉化細胞置于36.5℃溫箱培養,如用CO2溫箱培養,瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。
Erythromycin Gluceptate 23067-13-2 葡庚糖酸紅霉素標準品 200mg
Erythromycin Lactobionate 3847-29-8 乳糖酸紅霉素標準品 200mg
Erythromycin Stearate 643-22-1 硬脂酸紅霉素標準品 200mg
Escitalopram Oxalate 219861-08-2 草酸艾司西酞普蘭對照品標準品 200mg
Estradiol Cypionate 313-06-4 環戊丙酸雌二醇標準品 200mg
Estrone 53-16-7 雌酚酮標準品 200mg
Ethacrynic Acid 58-54-8 利尿酸標準品 200mg
Ethambutol Hydrochloride 1070-11-7 鹽酸乙胺丁醇標準品 200mg
Ethionamide 536-33-4 乙硫異煙胺標準品 200mg
Ethotoin 86-35-1 乙苯妥英標準品 200mg
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